É necessária uma assinatura da JoVE para visualizar este conteúdo. Faça login ou comece sua avaliação gratuita.
Capítulos
- 00:05Título
- 00:43Synthesis of NNS Sub-libraries for Each Amino Acid Position by Two-step PCR Site-directed Mutagenesis
- 01:53Cloning of NNS Sub-libraries into Selection Vectors
- 03:47Selection of the TEM-1 Whole-Protein Saturation Mutagenesis Library for Antibiotic Resistance
- 05:51High Throughput Sequencing to Determine Fitness Effects of Mutations
- 08:44Results: High Throughput Sequencing from Whole-Protein Saturation Mutagenesis
- 10:16Conclusion
Vi presenterar ett protokoll för funktionell bedömning av omfattande bibliotek av proteiner som använder hög genomströmning sekvense single-site mättnadsmutagenes. Viktigt använder detta tillvägagångssätt ortogonala primerpar att multiplexera bibliotekskonstruktion och sekvensering. Representativa resultat med hjälp av TEM-1 β-läktarnas väljs vid en kliniskt relevant dos av ampicillin tillhandahålls.
