Name: Ensaiar comportamentos alimentares predadores em Pristionchus E outros nematóides (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-09-04T15:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 27 s
Description: Aprenda a analisar comportamentos alimentares predadores em nematoides usando Pristionchus pacificus. Este método permite quantificar adaptações de alimentação e visualizar estruturas bucais para estudos de neurobiologia comportamental.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Agradecemos ao Dr. Daniel Bumbarger pelo quadro do comportamento de predação. Este trabalho foi financiado pela Sociedade Max-Planck.

1. Boca forma fenotipagem <ol><li> Boca Formulário de Identificação em agarose Pads Nota: Para visualizar os morphs boca de nematóides, imobilizar os vermes com um tratamento anestésico suave em almofadas de agarose e observar como se segue. <ol><li> Crescer e manter culturas de nematóides, tais como P. pacificus em 6 cm de mídia crescimento de nemátodos padrão (NGM) placas e alimentos em um gramado de bactérias E. coli OP50 19. </li><li> Adicione almofadas de agarose adicionando primeiro 0,06 g de agarose em 3 ml de H 2 O em um tubo de 15 ml para fazer uma solução de agarose a 3 ml de 2%. Este pode ser armazenado durante até um ano a 4 ° C. </li><li> Misture e derreter a agarose cuidadosamente em um forno de microondas ou, alternativamente, use um bloco de calor colocado em&gt; 88 ° C. </li><li> Uma vez completamente derretido, adicionar 10 ul de uma solução de azida de sódio a 10% para a agarose e homogeneiza-se. CUIDADO: azida de sódio seco é reactivo e todas as formas são tóxicos. </li><li> Utilizando uma mistura 1 mlmicropipeta, colocar uma gota de não menos do que 300 ul de azida de agarose a mistura líquida para o meio de uma lâmina de microscópio de vidro padrão. </li><li> Antes de o agar arrefece, colocar rapidamente uma segunda lâmina de microscópio sobre o topo da gota de modo a achatar a agarose, que forma uma almofada após arrefecimento. Repita o procedimento para o maior número de almofadas como é exigido. </li><li> Imediatamente antes da utilização, casca Além as lâminas de microscópio de vidro deslizando-os um do outro. Nota: Se as almofadas de agarose são preparados com muita antecedência eles podem ser excessivamente seco e pode danificar os nematóides. </li><li> Para transferir vermes para as almofadas de agarose anestésicos, colocar uma gota de tampão M9 (2-3 ul) para o centro da almofada. Escolha 2-3 jovem P. adultos pacificus para a gota de M9, antes de colocar uma lamela com cuidado sobre a almofada. O P. nemátodos pacificus será imobilizado em agarose e pronto para visualizar. </li><li> Transferir a lâmina de microscópio contendo o worm anestesiado para um microscópio de uma adequadand observar sob 63X Nomarski óptica. Categorizar identidades morfo com base nas seguintes características: a presença de uma sub-ventral dente adicional, dente dorsal alargada e abertura de boca larga é indicativo de um animal Morph boca eurystomatous, enquanto que a presença de um único dente dorsal e abertura de boca estreita indica um stenostomatous animais (Figura 1). Nota: A fim de manter a saúde do animal, vermes deve ser mantida na almofada de ágar de não mais do que 5 minutos. </li><li> Depois boca identificação de metamorfose, recuperar nematóides quer eurystomatous ou stenostomatous conforme exigido pela remoção da tampa de deslizamento, deslizando-o do bloco de agarose. Cuidadosamente pegar os animais selecionados a partir do bloco de agarose (E. coli OP50 pode ser usado na seleção para ajudar a tornar mais rígidas) em placas NGM frescos. Permitir a recuperação da anestesia até o comportamento motile normal foi retomado em que os animais estão prontos para mais ensaios predatórias. </li></ol></li> &lt;li&gt; rápida Boca fenotipagem Nota: Como alternativa, com mais experiência, boca tipo de formulário pode ser analisada sem a necessidade de qualquer tratamento anestésico através de um microscópio estereoscópico com ampliação elevada (150X). <ol><li> Nematóides colocam placas NGM padrão com um gramado bacteriana de E. coli OP50 na área de visualização do microscópio. </li><li> Detectar diferenças no tamanho da boca e largura. Nota: Neste ampliação sem o dente como estruturas são observáveis, portanto, a identificação de metamorfose boca está baseada exclusivamente no largas bocas contra bocas estreitas. </li></ol></li></ol> Ensaio 2. mordida Nota: Os ensaios Morder permitir uma análise comportamental predatória detalhado. <ol><li> Crescer e manter culturas de nematóides em placas NGM padrão (6 cm) e se alimentam de um gramado de bactérias E. coli OP50 19. </li><li> Fazer placas de ensaio por crescimento de uma grande quantidade de larvas de nemátodos presa seleccionado, tal como C. elegans ou alternatively uma presa ecologicamente relevantes apropriado. Nota: Adulto C. elegans são demasiado grandes para ser presa adequada de modo que é importante usar a fase larvar. <ol><li> Manter C. elegans ou outras espécies de presas potenciais em placas NGM padrão e alimentos em um gramado de bactérias E. coli OP50 até que a população é preparado na fome, resultante em uma abundância de larvas L1 jovem. Nota: Tempo de inanição é dependente de numerosos factores ambientais e experimentais, incluindo o número de nemátodos utilizados para iniciar a cultura, a quantidade de E. coli OP50 adicionado, e a temperatura ambiente. </li></ol></li><li> Lavar quatro ou mais placas presas recém-esfomeados com M9 e passar a solução verme através de dois filtros de 20 fim de remover todos os animais de grande porte e todos os ovos restantes antes da coleta em um tubo de 15 ml. Apenas um pequeno larvas devem permanecer na solução. </li><li> Para formar um sedimento das larvas centrifugar a presa filtrado a 377 xg durante 1 min. </li><li&gt; Pipeta 3 ul de pellet verme pura em uma placa NGM seis centímetros sem E. coli OP50 presente e esperar pelo menos 30 minutos para as larvas para se espalhar o suficiente para gerar uma placa de ensaio. Nota: 3 ul de pellet verme pura nas placas de ensaio padrão contêm&gt; 3.000 larvas presa. Isto é suficiente para gerar contactos frequentes entre predadores e presas. </li><li> Tela nematóides predadores para a metamorfose boca exigida (protocolo 1). </li><li> Usando vermes escolhendo técnicas padrão e um microscópio estereoscópico luz 19, transferir predadores corretamente classificados para a placa de ensaio. Tome cuidado para transferir como pequenas bactérias OP50 quanto possível para a placa de ensaio quando a transferência de predadores, a fim de minimizar a contaminação bacteriana. Aguarde 15 minutos para permitir que o worm para se recuperar do estresse de ser transferida e verificar o comportamento móveis do tipo selvagem para garantir vermes não foram danificados a partir da transferência. Nota: Não há necessidade de passar fome P. pacificus, como eles são predadores altamente eficientes de outras larvas de nematóides, mesmo quando bem alimentadas mediante bactérias. </li><li> Após a recuperação, observar o predador usando um microscópio estereoscópico luz por 10 min. Com este equipamento, observar e caracterizar eventos de alimentação distintas, como morder, caracterizado pelo predador restringir o movimento da presa, matando, onde por uma abertura da cutícula presa é detectado; e alimentação, categorizados por um consumo observável das vísceras de presas (Figura 2A, B e Filme 1). </li><li> Repetir o ensaio de rastreio e pela observação de um mínimo de 10 nemátodos predadores individuais para assegurar a precisão. </li></ol> Ensaio 3. Corpse Nota: Os ensaios Corpse facilitar uma quantificação mais rápida do comportamento predatório. <ol><li> Crescer e manter culturas de nematóides em placas NGM padrão e alimentam-se de um l bacterianaawn de E. coli OP50 19. Gerar triplicados das placas de ensaio mencionados anteriormente (protocolo 2,1-2,5). </li><li> Tela nematóides predadores para a metamorfose boca exigida como descrito no protocolo 1. Usando vermes escolhendo técnicas padrão e uma transferência de luz microscópio estereoscópico 5 nematóides predadores com a metamorfose boca necessário para cada placa de ensaio. Deixar os predadores em conjunto com a presa durante 2 h. </li><li> Após 2 h tela da placa de ensaio para a presença de corpos esvaziados (Figura 2B e C). Identificar cadáveres pela ausência de motilidade, juntamente com defeitos morfológicos óbvios, incluindo vazamento vísceras ou faltando fragmentos vermes. </li></ol> 4. Análise da faringe e movimentação dentária <ol><li> Crescer e manter culturas de nematóides em placas NGM padrão e alimentam-se de um gramado de bactérias E. coli OP50 19. Gerar placas de ensaio tal como mencionado anteriormente (protocolo de 2,1-2,5). Se padrão 6 cmplacas NGM não se encaixam entre o objetivo eo estágio do microscópio, utilize a tampa de pratos pequenos de 35 mm de petri contendo 2 ml NGM como uma alternativa adequada. </li><li> Tela nematóides predadores para a metamorfose boca requeridos descritos no protocolo 1. Usando verme padrão escolhendo técnicas e uma lupa luz, transferir um único predador corretamente classificados para a placa de ensaio. Aguarde 15 minutos para permitir que o worm para se recuperar do estresse de ser transferido. </li><li> Observar animais predadores em um microscópio a 40 - 63X Normaski, com uma câmera de alta velocidade (Filmes 2 e 3). Registro da faringe bombeamento e movimento dentário mais de 15 segundos, a 50 Hz em pelo menos 20 animais para garantir a quantificação precisa. Repetição de filmes gravados na velocidade desejada, a fim de contar com bombas individuais e eventos dente. Nota: O bombeamento é observado no corpus, localizado no meio da faringe, enquanto que o movimento do dente é detectável na abertura da boca e só é observido a partir do dente dorsal. </li></ol>

<ol><li>Wilecki, M., Lightfoot, J. W., Susoy, V., Sommer, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Predatory+feeding+behaviour+in+Pristionchus+nematodes+is+dependent+on+phenotypic+plasticity+and+induced+by+serotonin%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Biol%22%5BJournal%5D)">Predatory feeding behaviour in Pristionchus nematodes is dependent on phenotypic plasticity and induced by serotonin.</a> J Exp Biol. 218 (Pt 9), 1306-1313 (2015).</li>
<li>Ragsdale, E. J., Muller, M. R., Rodelsperger, C., Sommer, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Developmental+Switch+Coupled+to+the+Evolution+of+Plasticity+Acts+through+a+Sulfatase%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">A Developmental Switch Coupled to the Evolution of Plasticity Acts through a Sulfatase.</a> Cell. 155 (4), 922-933 (2013).</li>
<li>Goodman, M. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanosensation%5BTitle%5D)+AND+%22WormBook%22%5BJournal%5D)">Mechanosensation.</a> WormBook. , 1-14 (2006).</li>
<li>Rankin, C. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nematode+behavior%3A+the+taste+of+success%2C+the+smell+of+danger%21%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Biol%22%5BJournal%5D)">Nematode behavior: the taste of success, the smell of danger!</a> Curr Biol. 16 (3), R89-R91 (2006).</li>
<li>Beverly, M., Anbil, S., Sengupta, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Degeneracy+and+neuromodulation+among+thermosensory+neurons+contribute+to+robust+thermosensory+behaviors+in+Caenorhabditis+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Degeneracy and neuromodulation among thermosensory neurons contribute to robust thermosensory behaviors in Caenorhabditis elegans.</a> J Neurosci. 31 (32), 11718-11727 (2011).</li>
<li>Kimata, T., Sasakura, H., Ohnishi, N., Nishio, N., Mori, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Thermotaxis+of+C.+elegans+as+a+model+for+temperature+perception%2C+neural+information+processing+and+neural+plasticity%5BTitle%5D)+AND+%22Worm%22%5BJournal%5D)">Thermotaxis of C. elegans as a model for temperature perception, neural information processing and neural plasticity.</a> Worm. 1 (1), 31-41 (2012).</li>
<li>Vidal-Gadea, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Magnetosensitive+neurons+mediate+geomagnetic+orientation+in+Caenorhabditis+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22Elife%22%5BJournal%5D)">Magnetosensitive neurons mediate geomagnetic orientation in Caenorhabditis elegans.</a> Elife. 4, (2015).</li>
<li>Chute, C. D., Srinivasan, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chemical+mating+cues+in+C.+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22Semin+Cell+Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Chemical mating cues in C. elegans.</a> Semin Cell Dev Biol. 33, 18-24 (2014).</li>
<li>Sherlekar, A. L., Lints, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nematode+Tango+Milonguero+-+the+C.+elegans+male%27s+search+for+the+hermaphrodite+vulva%5BTitle%5D)+AND+%22Semin+Cell+Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Nematode Tango Milonguero - the C. elegans male's search for the hermaphrodite vulva.</a> Semin Cell Dev Biol. 33, 34-41 (2014).</li>
<li>Sasakura, H., Mori, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Behavioral+plasticity%2C+learning%2C+and+memory+in+C.+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Neurobiol%22%5BJournal%5D)">Behavioral plasticity, learning, and memory in C. elegans.</a> Curr Opin Neurobiol. 23 (1), 92-99 (2013).</li>
<li>Avery, L., You, Y. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((C.+elegans+feeding%5BTitle%5D)+AND+%22WormBook%22%5BJournal%5D)">C. elegans feeding.</a> WormBook. , 1-23 (2012).</li>
<li>Bumbarger, D. J., Riebesell, M., Rodelsperger, C., Sommer, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((System-wide+Rewiring+Underlies+Behavioral+Differences+in+Predatory+and+Bacterial-Feeding+Nematodes%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">System-wide Rewiring Underlies Behavioral Differences in Predatory and Bacterial-Feeding Nematodes.</a> Cell. 152 (1-2), 109-119 (2013).</li>
<li>Dieterich, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Pristionchus+pacificus+genome+provides+a+unique+perspective+on+nematode+lifestyle+and+parasitism%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Genetics%22%5BJournal%5D)">The Pristionchus pacificus genome provides a unique perspective on nematode lifestyle and parasitism.</a> Nature Genetics. 40 (10), 1193-1198 (2008).</li>
<li>Schlager, B., Wang, X. Y., Braach, G., Sommer, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+Cloning+of+a+Dominant+Roller+Mutant+and+Establishment+of+DNA-Mediated+Transformation+in+the+Nematode+Pristionchus+pacificus%5BTitle%5D)+AND+%22Genesis%22%5BJournal%5D)">Molecular Cloning of a Dominant Roller Mutant and Establishment of DNA-Mediated Transformation in the Nematode Pristionchus pacificus.</a> Genesis. 47 (5), 300-304 (2009).</li>
<li>Witte, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gene+inactivation+using+the+CRISPR%2FCas9+system+in+the+nematode+Pristionchus+pacificus%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Genes+Evol%22%5BJournal%5D)">Gene inactivation using the CRISPR/Cas9 system in the nematode Pristionchus pacificus.</a> Dev Genes Evol. 225 (1), 55-62 (2015).</li>
<li>Lo, T. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Precise+and+Heritable+Genome+Editing+in+Evolutionarily+Diverse+Nematodes+Using+TALENs+and+CRISPR%2FCas9+to+Engineer+Insertions+and+Deletions%5BTitle%5D)+AND+%22Genetics%22%5BJournal%5D)">Precise and Heritable Genome Editing in Evolutionarily Diverse Nematodes Using TALENs and CRISPR/Cas9 to Engineer Insertions and Deletions.</a> Genetics. 195 (2), 331-348 (2013).</li>
<li>Sommer, R. J., McGaughran, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+nematode+Pristionchus+pacificus+as+a+model+system+for+integrative+studies+in+evolutionary+biology%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Ecology%22%5BJournal%5D)">The nematode Pristionchus pacificus as a model system for integrative studies in evolutionary biology.</a> Molecular Ecology. 22 (9), 2380-2393 (2013).</li>
<li>Herrmann, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+nematode+Pristionchus+pacificus+%28Nematoda+%3A+Diplogastridae%29+is+associated+with+the+oriental+beetle+Exomala+orientalis+%28Coleoptera%3AScarabaeidae%29+in+Japan%5BTitle%5D)+AND+%22Zoological+Science%22%5BJournal%5D)">The nematode Pristionchus pacificus (Nematoda : Diplogastridae) is associated with the oriental beetle Exomala orientalis (Coleoptera:Scarabaeidae) in Japan.</a> Zoological Science. 24 (9), 883-889 (2007).</li>
<li>Chaudhuri, J., Parihar, M., Pires-daSilva, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+Introduction+to+Worm+Lab%3A+from+Culturing+Worms+to+Mutagenesis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">An Introduction to Worm Lab: from Culturing Worms to Mutagenesis.</a> J Vis Exp. (47), e2293(2011).</li>
<li>Serobyan, V., Ragsdale, E. J., Sommer, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adaptive+value+of+a+predatory+mouth-form+in+a+dimorphic+nematode%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+R.+Soc.+B+Biol.+Sci%22%5BJournal%5D)">Adaptive value of a predatory mouth-form in a dimorphic nematode.</a> Proc. R. Soc. B Biol. Sci. 281, 20141334(2014).</li>
<li>Albrecht, D. R., Bargmann, C. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-content+behavioral+analysis+of+Caenorhabditis+elegans+in+precise+spatiotemporal+chemical+environments%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Methods%22%5BJournal%5D)">High-content behavioral analysis of Caenorhabditis elegans in precise spatiotemporal chemical environments.</a> Nat Methods. 8 (7), 599-605 (2011).</li>
<li>Yeminin, E., Jucikas, T., Grundy, L. J., Brown, A. E., Schafer, W. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+database+of+Caenorhabditis+elegans+behavioral+phenotypes%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Methods%22%5BJournal%5D)">A database of Caenorhabditis elegans behavioral phenotypes.</a> Nat Methods. 9 (10), 877-879 (2013).</li>
<li>Raizen, D. M., Lee, R. Y. N., Avery, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interacting+Genes+Required+for+Pharyngeal+Excitation+by+Motor+Neuron+MC+in+Caenorhabditis+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22Genetics%22%5BJournal%5D)">Interacting Genes Required for Pharyngeal Excitation by Motor Neuron MC in Caenorhabditis elegans.</a> Genetics. 141 (4), 1365-1382 (1995).</li>
</ol>

Os autores declaram não ter interesses financeiros ou conflitantes.

Nematóides fornecer um sistema poderoso para a compreensão da neurobiologia e comportamento com C. elegans, até agora, sendo a principal ferramenta. No entanto, numerosas espécies de nematóides, incluindo P. exibem comportamentos pacificus, que estão ausentes ou variam em complexidade do organismo modelo C. elegans e, portanto, levantar questões fascinantes sobre a evolução e regulação desses comportamentos. Um tal comportamento adicional encontradas em muitas outras espécies de nematóides, incluindo P. pacificus é a capacidade de complementar sua dieta bacteriana por engajar na alimentação predatória 1, 20. Temos, portanto, desenvolvido e descrito um protocolo detalhado para a caracterização fácil e rápida destes comportamentos predatórios anteriormente não analisados ​​em nematóides. Em primeiro lugar, nós fornecemos métodos para triagem de variações na alimentação de aparelhos dentro da boca do nematóide. A identificação do tipo boca correta é um primeiro s essencialtep para ensaios predação bem sucedidos como, pelo menos, dentro do género Pristionchus únicos animais eurystomatous são capazes de alimentação predador. É melhor para identificar boca se transforma com o protocolo &quot;rápida fenotipagem boca&quot; descrito no protocolo 1.2 como este método é muito menos invasiva e, portanto, é menos provável que os comportamentos predatórios pode ser perturbado. No entanto, recomenda-se a primeira a se familiarizar com as diferentes estruturas da boca pela identificação com animais anestesiados em almofadas de ágar (protocolo 1.1). Após a identificação da metamorfose boca desejado, nós descrevemos dois ensaios para quantificar a alimentação predatória. Estes são, alto rendimento &quot;ensaio de cadáver&quot; rápida (protocolo 3) e um mais demorado, mas a análise comportamental mais aprofundada através do &quot;ensaio de mordida&quot; (protocolo 2). Ambos os protocolos estão altamente flexível para permitir que várias modificações, a fim de optimizar os ensaios dependendo das experimenrequisitos Tal. Para os ensaios de mordida usando P. predadores pacificus sobre C. elegans presa, observações comportamentais de interacções predadores para uma janela de tempo de 10 minutos era suficiente para quantificar uma quantidade significativa de picadas, juntamente com outros eventos de alimentação. Para os &quot;ensaios de cadáver&quot; novamente utilizando P. predadores pacificus sobre C. elegans presa, 5 predadores para 2 horas produziu números cadáver facilmente quantificáveis ​​e consistentes que permitam a análise comportamental rápida. No entanto, deve notar-se diferentes espécies de movimento de nemátodos predadores em velocidades diferentes, coma a velocidades diferentes e, em geral demonstram um grande diversidade de outros comportamentos 1. Além disso, espécies de presas diferentes também pode ser comido em taxas diferentes por razões semelhantes. Portanto, é recomendável para otimizar os ensaios com base nas espécies de nematóides testados tanto como predadores e presas, e também para quaisquer diferenças nas condições ambientais. Durante os dois &quot;mordida&quot; e &quot;corpse &quot;ensaios é fundamental que ambas presas e predadores são saudáveis, como salientou ou predadores feridos não vai matar de forma eficiente. Além disso, placas de ensaio frescos são essenciais como placas mais velhas podem se tornar seca que afeta negativamente a saúde dos nematóides levando a errônea os ensaios. espera-se também que as futuras iterações destes ensaios predadores será capaz de tirar proveito dos avanços recentes na tecnologia, a fim de automatizar grande parte da análise em que foi realizado para investigar muitos comportamentos observados em C. elegans 21, 22. Actualmente problemas podem surgir em nematóides, tais como P. pacificus como eles aparecem muito mais sensíveis ao contacto, tornando o isolamento e imobilização em câmaras microfluídicos susceptíveis de revogar a alimentação predatória. Superar isso pode ser um desafio, mas facilitaria nematóides individuais a serem selecionados para sutil predatória comportamentos. Finalmente, temos também forneceu métodos for examinar o aparelho de alimentação nematóide si facilitando comparações entre os modos de alimentação predatórias e bacterianas através da quantificação da cinética do dente e de bombeamento da faringe usando uma câmera de alta velocidade (protocolo 4). A quantificação das taxas de faringe bombeamento em C. elegans foi utilizada para monitorar a alimentação durante muitos anos 23, no entanto, C. elegans carece de qualquer forma de denticle boca e também carece de comportamentos predatórios. Através da combinação da quantificação da faringe bombeamento com que a actividade de dente, qualquer inervação dos dentes específicos para a predação pode ser também observada. Devido à ampliação necessária para observar o movimento dentário os animais movem-se frequentemente para fora do plano focal, portanto, normalmente só é possível observar o dente por janelas de tempo curtos. Além disso, ao contrário C. elegans, da faringe de P. pacificus não continuamente bombear, em vez disso, se envolve em períodos de bombeamento e alimentação. Portanto, para pum faringe precisastaxas de Ping ao alimentar a ser determinada, é importante para a ficha 15 seg de alimentação contínua. Estes métodos aqui apresentados, por conseguinte, fornecem a primeira estrutura para investigar comportamentos predadores em sistemas de nematóides. Além disso, eles também podem ser adaptável para utilização em investigação de outras interacções dentro do ecossistema nemátodo incluindo a influência dos organismos adicionalmente ecologicamente relevantes na predação incluindo microrganismos, fungos e ácaros . Assim, eles fornecem um meio para dissecar como esses comportamentos predatórios são regulados, como eles podem ter evoluído e também a sua importância ecológica.

Nematóides, com suas pequenas, mas complexos sistemas nervosos provaram ferramentas poderosas para a compreensão de muitos aspectos da neurobiologia incluindo comportamento. Grande parte desta investigação centrou-se no organismo modelo Caenorhabditis elegans em que uma riqueza de diferentes comportamentos foram dissecados e analisados ​​com sucesso. Estes incluem mecanosensorial 3, quimiotática 4, thermotactic 5,6 e magnetotáticos 7 influenciando acasalamento 8,9, aprendendo 10 e comportamentos alimentares 11. No entanto, outras espécies de nematóides mais distantemente relacionados exibem comportamentos que não são observadas na rabditídeos C. elegans ou alternativamente mostrar níveis adicionais de complexidade, o que levanta questões pertinentes sobre a sua evolução e regulação. Um tal exemplo disto pode ser observado no nematóide diplogastrid distantemente relacionado Pristionchus pacificus, que exibe muito mais complexa ser a alimentaçãohaviors e ritmos que são observadas em C. elegans 1. Isto apesar de as duas espécies compartilhando neurônios faringe homólogas 12. Coincidindo com estes comportamentos alimentares adicionais, P. pacificus também exibe uma faixa dietética expandido, como eles são predadores ávidos, capazes de complementar sua dieta bacteriana por também alimentando-se de larvas de outros nematóides. Felizmente, P. pacificus foi desenvolvido como um modelo para a biologia evolutiva comparativa e integrativa e, portanto, muitas ferramentas moleculares e genéticos estão agora disponíveis. Estes incluem um genoma totalmente sequenciado e anotado 13, ferramentas moleculares e genéticos, incluindo transgenes 14 e CRISPR / Cas9 15,16, bem como uma filogenia detalhada e bem anotado 17 com mais de 25 espécies estreitamente relacionadas, incluindo as suas espécies irmãs recém-descobertas. Além disso, a ecologia de numerosas espécies incluindo P. Pristionchus pacificus é quell definido com muitas espécies tendo já sido descrita a partilha de uma associação necromenic com escaravelhos, um host eles freqüentemente compartilhar com outras espécies de nematóides 18. P. portanto, pacificus fornece um sistema modelo excelente com o qual a dissecar a evolução de novos comportamentos e da sua importância ecológica. A fim de analisar comportamentos alimentares predadores em espécies de nematóides, tais como P. pacificus desenvolvemos vários novos ensaios comportamentais para facilitar a observação e quantificação das ações predatórias. Como P. pacificus exibe uma estrutura boca dimorphic, que influencia fortemente o comportamento predatório, identificação do morfotipo correta é essencial 1,2. A metamorfose stenostomatous boca estreita contém um único dente dorsal contundente e não se envolver em qualquer alimentação predatória. Alternativamente, a grande metamorfose eurystomatous boca inclui um muito maior em forma de garra dente dorsal e um adicional de opostosdente sub-ventral, que juntos operam para abrir de forma eficiente a cutícula das suas presas. A razão entre o eurystomatous predador à forma stenostomatous não predadores varia entre as espécies e também dentro Pristionchus P. pacificus, no entanto, a percentagem de boca eurystomatous se transformar na P. pacificus selvagem cepa (pS312) é geralmente 70 - 90% 2. Além disso, as proporções de formulário boca pode variar dependendo de diferentes influências ambientais (ambos conhecidos, incluindo a fome e uma pequena molécula de sinalização, bem como factores desconhecidos), assim identificação correcta e isolamento da forma de boca eurystomatous predador é essencial para ensaios bem sucedidos predadores. Juntamente com a descrição da forma boca predatória, temos desenvolvido um &quot;ensaio de mordida&quot; para a observação direta e quantificação de comportamentos predatórios, incluindo morder, matando e alimentando eventos. Aqui nematóides presas são isolados através do filtroção de culturas recém-esfomeados e expostas a adultos predatória P. pacificus, que são observados em conjunto ao longo de um curto espaço de tempo. Além disso, também desenvolvemos um alto rendimento &quot;ensaio de cadáver&quot; para facilitar a triagem rápida de comportamento predatório através da observação indireta de eventos predatórias. Isto tira proveito da presença de corpos de larvas como uma ferramenta para o rastreio de predação. Ambos os ensaios proporcionam métodos fáceis e altamente repetíveis para observar e medir o comportamento predatório em espécies de nematóides, tais como P. pacificus.

<table><tbody><tr><td>Filtros de rede de nylon (20 &#181; m)</td> <td>Merck Millipore Ltd</td><td>NY2004700</td><td>Usado para filtrar vermes, deixando larvas para uso como presa.</td></tr><tr><td>Funil PP para filtro (54 mm)</td><td>Duran</td><td>292215003</td><td>Usado para filtrar vermes apenas deixando larvas para uso como presa.</td></tr><tr><td>Placa de Petri pequena (35/10 mm)</td><td>Greiner Bio-One&nbsp;</td><td>627102</td><td>Para imagens em câmera de alta velocidade</td></tr><tr><td>Zeiss SteREO Discovery V12</td><td></td><td></td><td>Para identificação de forma de boca</td></tr><tr><td>Axio-Imager A1</td><td></td><td></td><td>Para identificação de forma de boca</td></tr><tr><td>Lâminas de vidro</td><td>Roth</td><td>H869</td><td></td></tr><tr><td>Cover Slips</td><td>Roth</td><td>657</td><td></td></tr><tr><td>Motion Scope M3 Câmera de alta velocidade</td><td>IDT</td><td></td><td>Câmera de alta velocidade</td></tr><tr><td>Zoom de vídeo 44 ENG 1/2" 0.5X a 2.4X</td><td>Zeis</td><td>452984-0000-000</td><td>Zoom de câmera de alta velocidade</td></tr><tr><td>Meio de crescimento de nematóides (NGM) ingredientes:</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Agar</td><td>Roth</td><td>5210.2</td><td>CAS-Nr. 9002-18-0</td></tr><tr><td>Cloreto de sódio (NaCl)</td><td>Roth</td><td>3957</td><td>CAS-Nr. 7647-14-5</td></tr><tr><td>Bacto Triptona</td><td>BD</td><td>211699</td><td>Lote 4316614</td></tr><tr><td>Cloreto de cálcio di-hidratado (CaCl2)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C3306</td><td>CAS-Nr. 10035-04-8</td></tr><tr><td>Colesterol de lanolina</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>F 26732 00050</td><td>CAS-Nr. 57-88-5</td></tr><tr><td>Sulfato de magnésio heptahidratado (MgSO4)</td><td>Merck</td><td>1.058.861.000</td><td>CAS-Nr. 10034-99-8</td></tr><tr><td>Di-hidrogenofosfato de potássio (KH2PO4)</td><td>ACROS organics</td><td>271080025</td><td>CAS-Nr. 7778-77-0</td></tr><tr><td>Placa de Petri de 6 cm</td><td>Greiner Bio-One</td><td>628102</td><td></td></tr><tr><td>placa de Petri de 3,5 cm</td><td>Greiner Bio-One</td><td>627102</td><td></td></tr><tr><td>M9 ingredientes:</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Dihidrogenofosfato de potássio (KH2PO4)</td><td>ACROS organics</td><td>271080025</td><td>CAS-Nr. 7778-77-0</td></tr><tr><td>Hidrogenofosfato de sódio heptahidratado (NaHPO4)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S9390-500G-D</td><td>CAS-Nr. 7782-85-6</td></tr><tr><td>Cloreto de sódio (NaCl)</td><td>Roth</td><td>3957</td><td>CAS-Nr. 7647-14-5</td></tr></tbody></table>

ensaiar comportamentos alimentares predadores em<em&gt; pristionchus</em&gt; e outros nematóides

Assaying Predatory Feeding Behaviors in Pristionchus and Other Nematodes

Este protocolo fornece vários métodos para a análise e quantificação de comportamentos alimentares predatórios em nematóides. Muitas espécies de nematóides, incluindo Pristionchus pacificus, exibem comportamentos complexos, o mais impressionante dos quais é a predação de outras larvas de nematóides. No entanto, como esses comportamentos estão ausentes no organismo modelo Caenorhabditis elegans, eles foram descritos em detalhes até agora apenas recentemente, juntamente com o desenvolvimento de ensaios comportamentais confiáveis 1. Esses comportamentos predatórios dependem de morfos fenotipicamente plásticos, mas fixos, tornando essencial a correta identificação e categorização desses animais. Em P. pacificus existem dois tipos de boca, os morfos estenostomatosos e eurystomatous 2, com apenas os eurystomatous de boca larga contendo um dente extra e sendo capazes de matar outras larvas de nematóides. Através do isolamento de uma abundância de larvas de presas de tamanho correspondente e subsequente exposição a nematóides predadores, são possíveis ensaios incluindo "ensaios de cadáveres" e "ensaios de mordida" em nematóides morfos bucais corretamente identificados. Esses ensaios fornecem um meio de quantificar rapidamente as taxas de sucesso da predação e fornecer uma análise comportamental detalhada de nematóides individuais envolvidos em atividades de alimentação predatória. Além disso, com o uso de uma câmera de alta velocidade, também é possível visualizar as mudanças na atividade faríngea, incluindo a dinâmica dentária e de bombeamento.

<html> Após a identificação bem-sucedida da metamorfose boca apropriada na P. pacificus, claras diferenças entre animais eurystomatous e stenostomatous pode ser detectado (Figura 3) com apenas os animais eurystomatous engajar-se em matar comportamento. Em animais stenostomatous Este comportamento parece ser suprimido por completo. Além disso, as diferenças na atividade do dente e da faringe bombeamento de animais eurystomatous sobre as bactérias e presas (Figura 4 e Filmes 2 e 3) também são evidentes. Enquanto predador alimentação, a taxa de bombagem é reduzida abaixo do observado durante a alimentação bacteriana e o movimento do dente é detectada num rácio de 12:59 com o bombeamento da faringe. Isto é potencialmente indicativa de mecanismos reguladores-chave que modulam a resposta comportamental a diferentes dieta. s / ftp_upload / 54404 / 54404fig1.jpg &quot;/&gt; Figura 1. P. pacificus tem uma boca Dimorfismo que influencia Comportamento Alimentar. (A) A forma da boca eurystomatous é capaz de predação e tem uma abertura de boca larga com uma grande em forma de garra dente dorsal (falso-cor vermelha) e (B) um gancho adversária em forma sub-ventral dente grande (falsa cor azul). (C) a forma da boca stenostomatous só é capaz de se alimentar de bactérias e tem uma abertura de boca estreita com um em forma de sílex dente dorsal (falso-cor vermelha) e (D) no sub-ventral dente (*). Imagens Normaski são 63X e barra de escala representa 10 um. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/54404/54404fig1large.jpg" target="_blank">Por favor clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a> <img alt="Figura 2" src="/files/ftp_upload/54404/54404fig2.jpg" /> <strong&gt; Figura 2. predação Ensaios. (A) P. pacificus morde e mata as larvas de outros nematóides, tais como C. elegans. (B) Para os ensaios de morder, o número de bitesby predadores (*) pode ser observado através de um microscópio estereoscópico luz e assassinato de sucesso e alimentando eventos também gravados. Cadáveres também são claramente visíveis (círculos). (C) Para os ensaios de cadáveres, carcaças larvais (setas) pode ser facilmente identificado em comparação com larvas vivas. Barra de escala representa 1 mm de B e 150 mm em C. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/54404/54404fig2large.jpg" target="_blank">Por favor, clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a> <img alt="Figura 3" src="/files/ftp_upload/54404/54404fig3.jpg" /> Figura 3. Resultados da mordida e Corpse Ensaios em C. elegans Prey. (A) comportamento de morder só é evidente<html> na forma da boca eurystomatous com este comportamento não exibido em animais stenostomatous. Barra de erro representa o desvio padrão de 10 repetições. (B) Coincidindo com qualquer comportamento de morder evidente a partir de animais stenostomatous, ensaios de cadáver também revelam carcaças única sobre placas de ensaio de animais eurystomatous. Barra de erro representa o desvio padrão de 5 repetições. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/54404/54404fig3large.jpg" target="_blank">Por favor clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a> <img alt="Figura 4" src="/files/ftp_upload/54404/54404fig4.jpg" /> Figura 4. Eurystomatous bombeamento Taxa e Tooth Movement durante a alimentação predatório. O movimento dentário é observado apenas enquanto os animais eurystomatous estão envolvidos na alimentação predatória. Este coincide também com uma redução de bombeamento da faringe. barra de erro representa o desvio padrão de 10 repetições.<html> href = &quot;https://www.jove.com/files/ftp_upload/54404/54404fig4large.jpg&quot; target = &quot;_ blank&quot;&gt; Clique aqui para ver uma versão maior desta figura. <img alt="filme 1" src="/files/ftp_upload/54404/54404movie1.jpg" /> <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/54404/Movie_1_Killing_behaviour.mp4">Filme 1. Observação de Matar Comportamento para o Ensaio da mordida usando um Stereomicroscope Luz. (Clique direito a download).</a> <img alt="Movie 2" src="/files/ftp_upload/54404/54404movie2.jpg" /> <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/54404/Movie_2_HS_Camera_Killing.mp4">Câmara de Filmar Filme 2. Alta velocidade de P. pacificus matando C. elegans larvas. (Clique direito a download).</a> ad / 54404 / 54404movie3.jpg &quot;/&gt; <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/54404/Movie_3_HS_pumping_and_tooth.mp4">Filme 3. ampliada de alta velocidade da câmera do movimento dentário Durante predação. (Clique direito a download).</a>

Os ensaios comportamentais fornecem ferramentas poderosas para a compreensão da função neuronal. Aqui apresentamos vários protocolos para quantificar o comportamento alimentar predatório encontrado no nematóide modelo Pristionchus pacificus e seus parentes. Além disso, fornecemos métodos para analisar adaptações alimentares predatórias, incluindo estruturas bucais e dentes.

Ensaiar comportamentos alimentares predadores em<em&gt; Pristionchus</em&gt; E outros nematóides

This protocol provides multiple methods for the analysis and quantification of predatory feeding behaviors in nematodes. Many nematode species including ...

O objetivo geral desses procedimentos é analisar de forma confiável comportamentos alimentares complexos em nematoides predadores utilizando diversos ensaios inovadores. Esses métodos podem ajudar a responder perguntas fundamentais na área da neurobiologia comportamental, como a regulação de comportamentos complexos inéditos e, de fato, também a evolução. As principais vantagens dessas técnicas são que elas fornecem métodos rápidos e facilmente repetíveis para observar e quantificar comportamentos alimentares predatórios em nematoides, incluindo o organismo modelo satélite, Pristionchus pacificus.Para visualizar os morfos da boca dos nematoides, primeiro imobilize os vermes com um tratamento anestésico leve em uma lâmina recém-preparada com tampão de agarose a 2%. Para preparar o tampão, adicione cuidadosamente 10 microlitros de uma solução de azida de sódio a 10% em três mililitros de agarose derretida e misture completamente. A azida de sódio é reativa e tóxica, portanto tome as precauções adequadas.Em seguida, coloque pelo menos 300 microlitros da mistura no centro de uma lâmina de microscópio de vidro padrão e use outra lâmina para nivelar o agarose. Mantenha a lâmina superior na posição até que a lamínula esteja pronta para ser usada. Para preparar a lamínula para uso, remova a lâmina superior e adicione uma gota de M9. Em seguida, escolha dois ou três vermes, coloque-os na gota e aplique cuidadosamente uma lamínula.Observe os vermes com óptica Nomarski de 63x para categorizar suas identidades morfológicas. Um dente dorsal aumentado, um dente subventral adicional ou uma abertura bucal larga e ampliada são características de um animal euristomato. Já um único dente dorsal e uma abertura bucal mais estreita indicam um animal estenostomato.Em até cinco minutos, remova os nematoides do suporte anestésico. Deslize cuidadosamente a lamínula e transfira-os para uma placa MGM fresca. Aguarde até que apresentem comportamento móvel antes de qualquer análise adicional.Com mais experiência, o morfo pode ser analisado sem tratamento anestésico. Transfira 10 a 20 nematoides de uma placa de cultura padrão para uma placa fresca semada com um gramado bacteriano de OP50 para fenotipagem rápida da forma bucal usando um microscópio estereoscópico com alta magnificação. Em seguida, detecte diferenças no tamanho e largura da boca.Nesta ampliação, nenhuma estrutura semelhante a dentes é observável, portanto identifique os morfótipos bucais com base em suas larguras. Dessa forma, distingua bocas largas de bocas estreitas. Prepare as placas de ensaio cultivando uma grande quantidade de larvas de nematoides presa selecionados, como larvas do estágio de C.elegans ou uma presa ecològicamente relevante apropriada.Deixe em jejum quatro ou mais placas da espécie presa para coletar as larvas L1. Em seguida, lave as placas com M9 e passe a coleta por dois filtros de 20 mícrons. Apenas as larvas pequenas devem permanecer na solução.Centrifugue as larvas a 377 g durante um minuto. Remova o sobrenadante M9 para um béquer de resíduos e retire uma alíquota de três microlitros do pellet puro de vermes. Deposite os vermes no centro de uma placa MGM de seis centímetros sem E.coli e deixe-os espalhar por cerca de meia hora.Posteriormente, utilize as larvas para o ensaio de mordida. Transfira os predadores para a placa de ensaio com o mínimo possível de bactérias OP50. Para P.pacificus, adicione cinco predadores à placa.Aguarde 15 minutos para permitir que os animais transferidos se recuperem do estresse. Após 15 minutos, os vermes devem se mover normalmente; caso contrário, podem ter sido danificados. Agora, observe e registre eventos distintos realizados por um dos predadores durante 10 minutos.A mordida é caracterizada pela restrição do movimento da presa pelo predador. A morte ocorre quando o tegumento da presa é aberto. A alimentação é caracterizada pelo consumo observável das vísceras da presa.Observe pelo menos 10 nematoides predadores individuais para garantir a precisão. A bombagem faríngea e o movimento dos dentes podem ser observados com óptica Nomarski em uma ampliação de 40 a 63x e registrados com uma câmera de alta velocidade a 50 hertz. Após gravar clipes de 15 segundos de pelo menos 20 animais, os vídeos podem ser analisados de forma confiável.Observa-se bombeamento no corpo, localizado na parte média da faringe. O movimento dos dentes é detectável na abertura da boca e só é observado a partir do dente dorsal. Após duas horas de predação, examine a placa em busca de cadáveres vazios.Identifique os cadáveres pela ausência de motilidade e defeitos morfológicos evidentes, incluindo vazamento de vísceras ou fragmentos de vermes ausentes. Após a identificação bem-sucedida do morfo bucal apropriado em P.pacificus, foram observadas diferenças claras entre animais euristomatosos e estenostomatosos. Apenas os animais euristomatosos exibiram comportamento de ataque letal.Além disso, as diferenças na atividade dentária e na bombagem faríngea de animais euristomatos sobre bactérias e presas também são evidentes. Durante a alimentação predatória, a taxa de bombagem é reduzida abaixo da observada durante a alimentação bacteriana e o movimento dos dentes ocorre em sincronia com a bombagem faríngea. Após assistir a este vídeo, você deverá ter uma boa compreensão de como combinar esses diferentes ensaios para caracterizar comportamentos complexos de alimentação predatória em nematoides, incluindo no organismo modelo satélite Pristionchus pacificus.

assaying-predatory-feeding-behaviors-pristionchus-other

Research

JoVE Journal

Environment

Ambiente

Este vídeo apresenta a quimiotaxia no nematóide C. elegans e mostra um protocolo de amostra testando a aversão quimiotática ao sulfato de cobre.

C. elegans Ensaio de quimiotaxia: um método para testar a quimiossensação em vermes

Este vídeo descreve um ensaio de evitação osmótica para examinar o comportamento de quimioevitação em um modelo de verme transgênico. O comportamento de evitação é testado em uma placa na presença de uma barreira osmótica alta e quimioatraente. Os vermes com perda funcional de neurônios são atraídos pelo quimioatraente, atravessam a barreira osmótica alta e ficam paralisados na zona de armadilha por causa da solução anestésica.

Examine o comportamento de prevenção de quimioterapia em vermes transgênicos usando o ensaio de prevenção osmótica

Nematóides entomopatogênicos são vermes que vivem no solo que parasitam uma grande variedade de insetos. Demonstramos métodos de amostragem utilizados para o isolamento destes nematóides do solo utilizando duas técnicas: a iscagem inseto ea armadilha Branco modificado, para a recuperação de nematóides de amostras de solo e cadáveres de insetos infectados, respectivamente.

Amostragem do solo e isolamento de nematóides entomopatogênicos (Steinernematidae, Heterorhabditidae)

Um protocolo para investigar o comportamento de acasalamento do nematoide da madeira do pinheiro, Bursaphelenchus xylophilus, é apresentado. As características comportamentais de B. xylophilus são descritas no processo de acasalamento.

Observação e quantificação do comportamento de acasalamento no nemátodo do pinheiro, Bursaphelenchus xylophilus

Aqui, apresentamos um ensaio específico de Caenorhabditis elegans projetado para avaliar mudanças no comportamento de aversão ao cobre e a capacidade de localizar uma fonte de alimento comum, à medida que o organismo progride de um estado nutricional bem alimentado para morrer de fome.

UMA<em&gt; Caenorhabditis elegans</em&gt; Ensaio de Aversão ao Cobre Baseado em Status Nutricional

Apresentamos uma configuração e protocolo de gravação de comportamento que permitem análise automatizada do nematóide, preferência de Caenorhabditis elegans por compostos solúveis em um ensaio populacional. Este artigo descreve a construção de uma câmara de comportamento, o protocolo de ensaio comportamental e o uso de software de análise de vídeo.

Análise automatizada de um ensaio de preferência quimiossensorial baseado na população de um nematodo

Este protocolo descreve um método para extrair eficientemente nematoides vivos de substratos naturais no campo.

Isolamento Rápido de Nematoides Selvagens por Baermann Funnel

Este protocolo pode ser usado para realizar levantamentos ecológicos em larga escala de nematodes caenorhabditis autodes . A principal vantagem desse método é a eficiente organização e análise de dados ecológicos e moleculares associados aos nematoides coletados da natureza.

Uma abordagem altamente escalável para realizar pesquisas ecológicas de nematodes de caenorhabditis

Caenorhabditis elegans é uma das principais espécies modelo em biologia, mas quase todas as pesquisas são realizadas na ausência de seus micróbios naturalmente associados. Os métodos descritos aqui ajudarão a melhorar nossa compreensão da diversidade de micróbios associados como base para futuras pesquisas funcionais de C. elegans.

Isolamento e Caracterização da Microbiota Natural do Nematoide Modelo Caenorhabditis elegans

Aqui, um sistema é relatado para estudar os comportamentos coletivos de nematoides através de cultivá-los a granel usando meio ágar ração para cães. Este sistema permite aos pesquisadores propagar um grande número de vermes dauer e pode ser aplicado a Caenorhabditis elegans e outras espécies relacionadas.

O cultivo em larga escala de nematoides para estudar seus comportamentos coletivos

Este estudo avaliou as atividades biológicas de extratos de Tithonia diversifolia usando métodos baseados em radicais e um ensaio de eclosão de ovos in vitro (EHA) para avaliar seus efeitos sobre nematóides gastrointestinais em pequenos ruminantes. A metodologia e os principais achados são descritos, destacando o potencial desses extratos para o controle de parasitas.

Avaliação das propriedades antioxidantes e anti-helmínticas de extratos de Tithonia diversifolia contra ovos de nematóides gastrointestinais usando ensaios in vitro

Aprenda a analisar comportamentos alimentares predadores em nematoides usando Pristionchus pacificus. Este método permite quantificar adaptações de alimentação e visualizar estruturas bucais para estudos de neurobiologia comportamental.

Ensaiar comportamentos alimentares predadores em

Explorar mais vídeos