Journal
/
/
Термостабилизации, Expression, очистки и кристаллизации Серотонин Transporter человека Обязанный<em> S</em> -citalopram
JoVE Journal
Bioquímica
This content is Free Access.
JoVE Journal Bioquímica
Thermostabilization, Expression, Purification, and Crystallization of the Human Serotonin Transporter Bound to S-citalopram
DOI:

12:21 min

November 27, 2016

, ,

Capítulos

  • 00:05Título
  • 00:47Transfection of Adherent HEK293S GnTI-cells for Thermostability Screen
  • 02:24Scintillation Proximity-based Thermostability Screen with Citalopram
  • 04:18Expression of the Human Serotonin Transporter in HEK293S GnTI-cells
  • 05:24Affinity-purification of the Serotonin Transporter for Immunization and Crystallization
  • 07:12Formation of Transporter-antibody Complexes and Separation by Size-exclusion Chromatography
  • 08:21Crystallization of Transporter-antibody Complexes by Hanging Drop
  • 10:01Results: Thermostabilization and Crystallization of the Serotonin Transporter in an Antidepressant-bound State
  • 11:25Conclusion

Summary

Tadução automática

Эта рукопись описывает , как для скрининга thermostabilizing мутации, очищают человека переносчик серотонина, генерировать высокоаффинных антител, и кристаллизовать переносчика серотонина-антитело , связанный с антидепрессант S -citalopram. Этот протокол может быть адаптирован к изучению других сложных мембранных транспортеров, рецепторов и каналов.

Vídeos Relacionados

Read Article