Un modello di lesioni del midollo spinale contusivo basato sullo spostamento tissutale nei topi

L'obiettivo generale di questo video è quello di introdurre un nuovo modello di lesione contusiva del midollo spinale basata sullo spostamento dei tessuti, in grado di produrre una lesione contusiva costante del midollo spinale nei topi adulti. Questo modello di contusione può aiutare a rispondere a domande chiave nel campo sperimentale delle lesioni del midollo spinale. Il vantaggio principale di questa tecnica è che produce lesioni del midollo spinale molto coerenti.

Le implicazioni di questa tecnica si estendono alla terapia della lesione del midollo spinale perché questo modello fornisce strumenti affidabili e riproducibili per studiare i meccanismi della lesione e gli effetti delle terapie sperimentali. In generale, gli individui che non conoscono questo metodo avranno difficoltà perché non hanno familiarità con il nuovo impattore. La dimostrazione visiva di questo metodo è fondamentale in quanto diversi passaggi sono difficili da apprendere a causa delle operazioni manuali e software.

Inizia portando gli strumenti chirurgici dell'autoclave e lo stabilizzatore della colonna vertebrale in metallo sul tavolo chirurgico pulito. Scaldare un termoforo a 37 gradi Celsius. Quindi, posizionare il termoforo sul tavolo operatorio e coprire con teli chirurgici sterili.

questo studio vengono utilizzati topi femmina di 10 settimane, C57BL6J. Dopo aver somministrato un'iniezione intraperitoneale di ketamina e xilazina, verificare un livello adeguato di anestesia in assenza di qualsiasi risposta alla stimolazione della nocicezione indotta dal pizzico della zampa. Somministrare buprenorfina, un agente analgesico e carprofene, un farmaco antinfiammatorio non steroideo per via sottocutanea.

Usa un tagliacapelli elettrico per radere i peli sulla colonna vertebrale toracolombare. Strofinare la pelle con una soluzione di betadina e salviettine imbevute di alcol al 70%. Applicare un unguento oftalmico sulle cornee, per proteggere gli occhi dalla secchezza.

Dopo aver praticato un'incisione cutanea di 1,5 centimetri sulla parte posteriore dell'animale sopra le lamine vertebrali toraciche dalla nona all'undicesima, spingere rostralmente il tessuto adiposo sottocutaneo. Usando forbici sottili, pinze fini e un divaricatore agricolo, sezionare i muscoli paraspinali lontano dai processi spinosi e le lamine verso i fasci laterali su ciascun lato. Posizionare il mouse sul contenitore a forma di U dello stabilizzatore, bloccare bilateralmente i bracci in acciaio inossidabile sotto le faccette esposte della vertebra t10 e serrare i bracci con le viti a testa zigrinata ad essi attaccate.

Utilizzare un micro rongeur per rimuovere il processo spinoso t10 e la lamina che espone il modello dura sovrastante il midollo spinale. Posizionare il contenitore a forma di U con il mouse sul tavolino dell'impattatore e fissare il tavolino in posizione serrando le viti a testa zigrinata del supporto. Per impostare l'impattatore, ruotare prima la manopola del regolatore di pressione sul serbatoio dell'azoto per impostare l'azoto compresso a 20 libbre per pollice quadrato o 138 kilopascal per lo studio.

Sterilizzare la punta d'impatto da 1,2 millilitri con alcol al 70%. Quindi, apri il pacchetto software sul computer. Premere uno dei pulsanti della scatola di controllo per attivare la punta dell'impattatore in una posizione completamente estesa.

Sullo schermo del computer, sotto il livello zero impostato, fare clic su Inizia lettura per misurare la distanza dalla punta dello stantuffo completamente estesa. La distanza verrà mostrata come parametro di portata in questa zona. Quindi fare clic su imposta zero e un numero in millilitri verrà visualizzato nella casella del parametro zero.

Quindi, premere il pulsante uno sulla scatola di controllo per estrarre la punta dell'impattatore. Quindi, sbloccare la vite di fissaggio, tirare la vite per allontanare la punta dal percorso del raggio laser e ruotare la vite di 90 gradi in senso orario per bloccarla. Ora sposta il tavolino di montaggio, regolando i micro driver frontali e laterali per puntare il raggio laser al centro del midollo spinale dorsale esposto.

Dopo aver individuato il punto della lesione, misurare la distanza dei tessuti facendo clic sul pulsante di avvio della lettura sotto il livello di lesione impostato. Utilizzare il microdriver verticale per regolare lentamente la distanza tra il sensore e il midollo spinale, fino a raggiungere il parametro di spostamento desiderato. Questo è al di sotto del livello di infortunio impostato, nella casella dei parametri degli infortuni.

Quando viene raggiunto lo spostamento della lesione desiderato, registrare la distanza del tessuto mostrata nella casella dei parametri dell'intervallo, quindi definire lo spostamento o la lesione desiderati sottraendo la distanza o l'intervallo del tessuto dalla distanza della punta a zero. Quindi fare clic su imposta infortunio sotto il livello di infortunio impostato. Quindi, sbloccare la vite ruotandola di 90 gradi in senso antiorario.

Spingere la punta dell'impatto nella traiettoria del raggio laser e bloccare la vite ruotandola di 90 gradi in senso orario, fare clic sul pulsante Esegui sotto l'esperimento di esecuzione per eseguire l'impatto. Le caselle dei parametri mostreranno il tempo di infortunio in secondi, la forza in microvolt, la velocità in metri al secondo e lo spostamento dell'infortunio in millimetri. Dopo che tutti i dati sulle lesioni sono stati registrati e salvati, rimuovere il trogolo a forma di U con il mouse dal tavolino.

Quindi, confermare visivamente la lesione del midollo spinale al microscopio operatorio. Dopo aver suturato l'incisione a strati, iniettare all'animale un millimetro di soluzione fisiologica allo 0,9% per via sottocutanea per l'idratazione e posizionarlo su un tampone a temperatura controllata fino a quando non si riprende conoscenza. Quindi ospita il topo in una gabbia pulita con acqua e cibo facilmente accessibili.

Questi dati mostrano parametri di lesione incoerenti, dimostrano che l'impattatore può produrre lesioni affidabili e riproducibili. Questa sezione trasversale rappresentativa colorata con cresil violetto-eosina, mostra la regione t10 del midollo spinale dopo una lesione fittizia con lo spostamento di 0 millimetri. Questa immagine mostra l'epicentro di una lieve lesione contusiva del midollo spinale a t10, utilizzando il dispositivo con uno spostamento di 0,2 millimetri.

Questa lesione moderata è stata ottenuta utilizzando uno spostamento di 0,5 millimetri. Infine, questa grave lesione è il risultato di uno spostamento di 0,8 millimetri. Queste immagini dimostrano che questo nuovo impattatore può produrre lesioni da contusione graduale.

Una volta padroneggiata, questa tecnica può essere eseguita in 30 minuti se eseguita correttamente. Durante il tentativo di questa procedura, è importante ricordare di impostare lo zero per la punta dell'impattatore nei bersagli del midollo spinale. Dopo il suo sviluppo, questa tecnica ha aperto la strada ai ricercatori nel campo delle lesioni del midollo spinale, per esplorare meccanismi e terapie nei topi, nei ratti e nei primati non umani.

Dopo aver visto questo video, dovresti avere una buona comprensione di come utilizzare questo impattatore per produrre lesioni contusive del midollo spinale.