Journal
/
Pesquisa do Câncer
/
Utilizzando CRISPR/Cas9 Gene Editing per studiare l'attività oncogena di calreticulina mutante in cellule ematopoietiche Cytokine dipendente
JoVE Journal
Pesquisa do Câncer
É necessária uma assinatura da JoVE para visualizar este conteúdo.  Faça login ou comece sua avaliação gratuita.
JoVE Journal Pesquisa do Câncer
Using CRISPR/Cas9 Gene Editing to Investigate the Oncogenic Activity of Mutant Calreticulin in Cytokine Dependent Hematopoietic Cells
Please note that all translations are automatically generated. Click here for the English version.

Utilizzando CRISPR/Cas9 Gene Editing per studiare l'attività oncogena di calreticulina mutante in cellule ematopoietiche Cytokine dipendente

DOI:
10.3791/56726-v

•

10:21 min

•

January 05, 2018

•

,
1Division of Hematology, Department of Medicine,Brigham and Women’s Hospital, Harvard Medical School, 2Broad Institute, 3Dana-Farber Cancer Institute,Harvard Medical School

Capítulos

  • 00:05Título
  • 00:44Cloning sgRNA Oligos
  • 01:08Digestion of LentiGuide-puroVector
  • 02:04Ligation of Annealed Oligos into Digested Backbone
  • 03:02Generation of Cell Lines Stably Expressing spCas9
  • 05:40Reporter Assay for Cas9 Activity
  • 06:10Spinfection of sgRNAs into Cas9 Expressing Cells
  • 06:31Ba/F3 Cellular Transformation and Positive Selection using m-IL3 Withdrawal
  • 07:23Results: Use of CRISPR/Cas9 Tool and Ba/F3 Cellular Transformation to Study Oncogenic Potential of Mutated Calreticulin
  • 09:02Conclusion

Summary

Tadução automática

Tadução automática

Genica mirata di editing con CRISPR/Cas9 ha notevolmente facilitato la comprensione delle funzioni biologiche dei geni. Qui, utilizziamo la metodologia CRISPR/Cas9 a modello calreticulina mutazioni in cellule ematopoietiche citochina-dipendente al fine di studiare la loro attività oncogena.

Tags

Keywords: CRISPR/Cas9Gene EditingCalreticulinOncogenic ActivityCytokine Dependent Hematopoietic CellsHematological MalignanciesLentiGuide-Puro VectorBsmB1 Restriction EnzymePhosphataseLigationSTBL3 CellsHEK293T CellsTransfection

Article

Embed

ADICIONAR À PLAYLIST

Usage Statistics

Vídeos Relacionados

check_url/pt/56726?article_type=v

Il<em> Drosophila</em> Immaginale Disc tumore Modello: visualizzazione e la quantificazione di espressione genica e di Tumor invasività Utilizzando genetica Mosaici
check_url/pt/56726?article_type=v

Fabbricazione di lingua della matrice extracellulare e la ricostituzione di Carcinoma di cellule Squamous Tongue In Vitro
check_url/pt/56726?article_type=v

Fosfopeptide arricchimento accoppiata alla spettrometria di massa privo di etichetta quantitativa per indagare il Phosphoproteome nel carcinoma della prostata
check_url/pt/56726?article_type=v

Indagine delle dipendenze genetiche utilizzando dosaggi di concorrenza basati su CRISPR-Cas9
check_url/pt/56726?article_type=v

Utilizzo di CRISPR/Cas9 per eliminare GM-CSF nelle celle CAR-T
check_url/pt/56726?article_type=v

Controllo spaziale e temporale dell'iniziazione del melanoma murino dalle cellule staminali di melanociti mutanti
check_url/pt/56726?article_type=v

Rilevamento oncogenico della fusione genica utilizzando la reazione della catena di polimerasi multiplex ancorata seguita dal sequenziamento di nuova generazione
check_url/pt/56726?article_type=v

Isolamento ed espansione delle cellule T Killer citotokine indotte da citokine per il trattamento del cancro
check_url/pt/56726?article_type=v

Mappatura delle relazioni struttura-funzione dei fattori di trascrizione oncogenica disordinati utilizzando l'analisi trascrittomica
check_url/pt/56726?article_type=v

Valutazione in vitro della trasformazione oncogenica nelle cellule epiteliali mammarie umane

Read Article