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Using CRISPR/Cas9 Gene Editing to Investigate the Oncogenic Activity of Mutant Calreticulin in Cytokine Dependent Hematopoietic Cells
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CRISPR/Cas9를 사용 하 여 유전자 돌연변이 Calreticulin Cytokine 종속 조 혈 모 세포에서의 종양 활동을 조사 하기 위해 편집

DOI:
10.3791/56726-v

•

10:21 min

•

January 05, 2018

•

,
1Division of Hematology, Department of Medicine,Brigham and Women’s Hospital, Harvard Medical School, 2Broad Institute, 3Dana-Farber Cancer Institute,Harvard Medical School

Capítulos

  • 00:05Título
  • 00:44Cloning sgRNA Oligos
  • 01:08Digestion of LentiGuide-puroVector
  • 02:04Ligation of Annealed Oligos into Digested Backbone
  • 03:02Generation of Cell Lines Stably Expressing spCas9
  • 05:40Reporter Assay for Cas9 Activity
  • 06:10Spinfection of sgRNAs into Cas9 Expressing Cells
  • 06:31Ba/F3 Cellular Transformation and Positive Selection using m-IL3 Withdrawal
  • 07:23Results: Use of CRISPR/Cas9 Tool and Ba/F3 Cellular Transformation to Study Oncogenic Potential of Mutated Calreticulin
  • 09:02Conclusion

Summary

Tadução automática

Tadução automática

타겟된 유전자 CRISPR/Cas9를 사용 하 여 편집 크게 유전자의 생물 학적 기능에 대 한 이해를 촉진 했다. 여기, 우리가 그들의 종양 활동을 공부 하기 위하여 모델 calreticulin 돌연변이 cytokine 종속 조 혈 모 세포에서에 CRISPR/Cas9 방법론을 활용 합니다.

Tags

CRISPR/Cas9Gene EditingCalreticulinOncogenic ActivityCytokine Dependent Hematopoietic CellsHematological MalignanciesLentiGuide-Puro VectorBsmB1 Restriction EnzymePhosphataseLigationSTBL3 CellsHEK293T CellsTransfection

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