Journal
/
Pesquisa do Câncer
/
Usando CRISPR/Cas9 Gene edição para investigar a atividade oncogênica do mutante Calreticulin em células hematopoiéticas dependentes de Cytokine
JoVE Journal
Pesquisa do Câncer
É necessária uma assinatura da JoVE para visualizar este conteúdo.  Faça login ou comece sua avaliação gratuita.
JoVE Journal Pesquisa do Câncer
Using CRISPR/Cas9 Gene Editing to Investigate the Oncogenic Activity of Mutant Calreticulin in Cytokine Dependent Hematopoietic Cells

Usando CRISPR/Cas9 Gene edição para investigar a atividade oncogênica do mutante Calreticulin em células hematopoiéticas dependentes de Cytokine

DOI:
10.3791/56726-v

•

10:21 min

•

January 05, 2018

•

,
1Division of Hematology, Department of Medicine,Brigham and Women’s Hospital, Harvard Medical School, 2Broad Institute, 3Dana-Farber Cancer Institute,Harvard Medical School

Capítulos

  • 00:05Título
  • 00:44Cloning sgRNA Oligos
  • 01:08Digestion of LentiGuide-puroVector
  • 02:04Ligation of Annealed Oligos into Digested Backbone
  • 03:02Generation of Cell Lines Stably Expressing spCas9
  • 05:40Reporter Assay for Cas9 Activity
  • 06:10Spinfection of sgRNAs into Cas9 Expressing Cells
  • 06:31Ba/F3 Cellular Transformation and Positive Selection using m-IL3 Withdrawal
  • 07:23Results: Use of CRISPR/Cas9 Tool and Ba/F3 Cellular Transformation to Study Oncogenic Potential of Mutated Calreticulin
  • 09:02Conclusion

Summary

Tadução automática

Tadução automática

Gene alvo edição usando CRISPR/Cas9 facilitou muito a compreensão das funções biológicas dos genes. Aqui, nós utilizamos a metodologia CRISPR/Cas9 a mutações de calreticulin modelo em células hematopoiéticas dependentes de citocina para estudar sua atividade oncogênica.

Tags

CRISPR/Cas9Gene EditingCalreticulinOncogenic ActivityCytokine Dependent Hematopoietic CellsHematological MalignanciesLentiGuide-Puro VectorBsmB1 Restriction EnzymePhosphataseLigationSTBL3 CellsHEK293T CellsTransfection

Article

Embed

ADICIONAR À PLAYLIST

Usage Statistics

Vídeos Relacionados

o<em> Drosophila</em> Imaginal Modelo Disc Tumor: visualização e quantificação da expressão gênica e invasão tumoral Usando Mosaicos Genéticos

Fabricação de língua matriz extracelular e reconstituição da língua Carcinoma de células escamosas In Vitro

Enriquecimento de Fosfopeptida acoplado com espectrometria de massa livre de rótulo quantitativa para investigar o Phosphoproteome no câncer de próstata

Investigação de dependências genéticas utilizando ensaios de competição baseados em CRISPR-Cas9

Usando CRISPR/Cas9 para knock out GM-CSF em células CAR-T

Detecção de fusão gênica oncogênica usando a reação em cadeia de polimerase multiplex ancorada seguida por sequenciamento da próxima geração

Isolamento e Expansão de células T assassinas induzidas por citocina para tratamento de câncer

Mapeando as Relações Estrutura-Função de Fatores de Transcrição Oncogênica Desordenados usando análise transcriômica

Isolamento de Fluidos Proximais para Investigar o Microambiente Tumoral do Adenocarcinoma Pancreático

Avaliação In Vitro da Transformação Oncogênica em Células Epiteliais Mamárias Humanas

Read Article