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Un approccio di mutagenesi romanzo saturazione: Unico passaggio caratterizzazione della proteina regolatrice siti in RNA usando fosforotioati di legame
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A Novel Saturation Mutagenesis Approach: Single Step Characterization of Regulatory Protein Binding Sites in RNA Using Phosphorothioates
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Un approccio di mutagenesi romanzo saturazione: Unico passaggio caratterizzazione della proteina regolatrice siti in RNA usando fosforotioati di legame

DOI:
10.3791/57816-v

•

11:49 min

•

August 21, 2018

•

1Department of Molecular, Cellular and Developmental Biology,University of Colorado at Boulder

Capítulos

  • 00:04Título
  • 00:30Generation of a Library of Mutants – Doping DNA Template with Non-wild Type Nucleotides
  • 01:20Synthesis of RNA
  • 05:24Protein Binding Reaction and Separation of Bound RNA
  • 08:05Analysis of Iodine-cleaved Phosphorothioate Products for Detection of Mutant Nucleotide Positions
  • 09:07Results: Characterization of Protein Binding Site in RNA
  • 10:22Conclusion

Summary

Tadução automática

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Proteine che legano specifiche sequenze di RNA giocano un ruolo critico nell'espressione genica. Caratterizzazione dettagliata di questi siti di legame è cruciale per la nostra comprensione della regolazione genica. Qui, è descritto un approccio passo-passo per mutagenesi di saturazione dei siti di legame delle proteine nel RNA. Questo approccio è rilevante per tutti i siti di legame delle proteine nel RNA.

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Keywords: Saturation MutagenesisPhosphorothioatesRNAProtein Binding SiteIn Vitro TranscriptionT7 RNA Polymerase5′ End LabelingAlpha-thio NTPAlkaline PhosphataseT4 Polynucleotide KinaseGene Regulation

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