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Capítulos
- 00:04Título
- 00:41Cell Culturing
- 01:374tU Labeling with S. pombe as a Spike-in
- 03:20RNA Extraction and DNase Treatment
- 04:30Thiol-specific Biotinylation of Newly Synthesized RNA
- 06:05Purification of Newly Synthesized Fraction from Total and Unlabeled RNA Using Streptavidin-coated Magnetic Beads
- 07:18Results: Quantification of Newly Synthesized mRNA as a Proxy for RNA Polymerase II Activity
- 08:52Conclusion
Il protocollo qui descritto si basa sulla quantificazione genoma di nuova sintesi mRNA purificato da cellule di lievito etichettate con 4-tiouracile. Questo metodo permette di misurare la sintesi di mRNA disinserita dalla degradazione del mRNA e, quindi, fornisce una misurazione accurata della trascrizione del RNA polimerasi II.
