קיבעון ריאה תחת לחץ מתמיד על הערכה של אמפיזמה בעכברים
September 26th, 2019
מוצג כאן הוא פרוטוקול שימושי עבור קיבעון ריאה שיוצר מצב יציב עבור הערכה היסטולוגית של דגימות ריאה ממודל העכבר של אמפיזמה. היתרון העיקרי של מודל זה הוא שהוא יכול לתקן את הריאות הרבה עם הלחץ התמידי אותו ללא התמוטטות ריאה או בדלציה.
הלחץ המתמיד בתוך מכשיר קיבוע שומר על הריאות במצב מנופח למדי יצירת דגימת ריאות היסטולוגית המתאימה להערכת אמפיזמה עשן סיגריות קלה המושרה. היתרון העיקרי של מודל זה הוא שזה יכול לתקן ריאות רבות באותו זמן באמצעות אותו לחץ מתמיד ללא קריסת ריאות או דפלציה. הדגמת ההליך תהיה נאוקו ארנו סטודנט לתואר שני מהמעבדה שלי.
לאחר אישור חוסר תגובה לתנועה רפלקס לעשות חתך בעור ברקמת השריר לאורך הקו המדיאלי של העכבר, מכוון לאזור cephalic, לחתוך באופן מאוחר יותר כדי ליצור מרחב עבודה רחב יותר. לאחר חשיפת שכבת הסרעפת לנקב את הרקמה עם מלקחיים ולפתוח את שטח בית החזה. חותכים את אזור החזה ומאפשר לריאות וללב להיות חזותיים.
וחותכים את האולם השמאלי ואת החדר הימני. הכנס 24 מד cannula מחובר משאבת זלוף לתוך אזור החדר הימני ולכוון את cannula לאזור cephalic עד שהוא מגיע לעורק הריאה. לאחר מכן, להפעיל את המשאבה ולבלבל את הרקמה עם כ 200 מיליליטר של PBS במשך שעה אחת עד שכל רקמת הריאה השתנתה לצבע לבן.
בסוף התדלוק חתכו את רקמת החיבור המקיפה את קנה הנשימה, הריאות והלב, ולהשתמש בתפר כדי לקשור את הסונפנוס הראשי הנכון. לאחר מכן, לקצור את כל האונות הבודדות של הריאה הימנית ולמקם את הלב ואת האונות של הריאה השמאלית לתוך מזרקים בודדים 10 מיליליטר המכיל תיקון מתאים. נסיגה הבוכנה יצירת ואקום במזרק כדי לנפח את הריאות ולהסיר את הריאה מהמזרק.
הכנס 20 מד cannula לתוך קנה הנשימה ולהשתמש בתפר כדי לאבטח את cannula במקום. חבר מזרק מיליליטר אחד מלא fixative ל cannula ולמלא את הריאה עם תיקון נוסף כדי לבדוק דליפות. ודא כי אתר הכניסה היה מאובטח כדי למנוע את דגימת הריאה להתנתק לוח הריאה במהלך הקיבעון.
לאחר מכן להעביר את הרקמה לציוד לחץ קיבוע הריאות, הסרת המדגם וקשירת קנה הנשימה עם קשר בסוף תקופת הקיבוע. המרכיב התחתון של ציוד לחץ קיבוע הריאות שלתוכם מוכנסת דגימת הריאה מחובר באמצעות 20 אומד cannula לקצה זרימת הפורמלין עם stopcock שלוש דרך. לחץ נוצר מרמות פני השטח השונות של התיקון בין התאים התחתונים העליונים.
הפרש הלחץ הוא 25 ס"מ של מים אבל כפתור התאמת הגובה יכול לשמש כדי להתאים את הלחץ בין 25 ל 30 ס"מ של מים. משאבה מחברת את המכולות התחתונות והתחתונות, תוך שמירה על הפרש של 25 ס"מ בגובה פני השטח המקבע, ומכוונת את זרימת הסוכן. לאחר 48 שעות של קיבעון הריאות מעכברי נוקאאוט SMP30 החשופים לאוויר הסביבה אינן מפגינות הגדלה ניכרת של המרחב האווירי.
הגדלת מרחב אווירי משמעותית והרס קיר מכתשי, לעומת זאת, נצפו בעכברי נוקאאוט SMP30 חשופים לעשן סיגריות כרוני. בנוסף, היירוט ליניארי הממוצע והאינדקס ההרסני של דגימות הריאה גדולים משמעותית בעכברי הנוקאאוט SMP30 החשופים לעשן מאשר באוויר שנחשף לבעלי חיים. המעבדה שלנו משתמשת 10% פורמלין אבל החוקרים יכולים להשתמש סוכני קיבעון אחרים על פי הצרכים הניסיוניים שלהם.
כפי שדיווחנו באמצעות דגימות ריאות מערכת קיבעון הפגינו ניתן לקצור מודלים שונים של אמפיזמה העכבר להערכה מורפומטרית שלהם. כמו סוכני תיקון יכול להיות מסוכן תמיד ללבוש את ציוד מגן כוח אדם המתאים ולעבוד בחדר מאוורר היטב.
View the full transcript and gain access to thousands of scientific videos
סקירה
פרוטוקול זה מתאר שיטה לקיבוע ריאות המבטיח תנאים יציבים להערכה היסטולוגית של דגימות ריאות ממודל עכבר של אמפיזמה. הטכניקה מאפשרת קיבוע של ריאות מרובות בו זמנית ללא קריסה או התרוקנות.
מרכיבי מחקר עיקריים
תחום המדע
- נוירולוגיה
- ביולוגיה
- היסטולוגיה
רקע
- אמפיזמה היא מצב ריאות הנגרם לעיתים קרובות מעשן סיגריות.
- הערכה היסטולוגית חיונית להבנת הפתולוגיה של הריאות.
- שמירה על נפיחות הריאות במהלך הקיבוע חיונית להערכה מדויקת.
- פרוטוקול זה מתייחס לאתגרים בטכניקות קיבוע ריאות.
מטרת המחקר
- להציג שיטה אמינה לקיבוע ריאות.
- להקל על הערכת דגימות ריאות במחקר.
- לשפר את העקביות בניתוח היסטולוגי של מודלים של אמפיזמה.
שיטות ששימשו
- שימוש במתקן קיבוע השומר על לחץ קבוע.
- חתך לאורך הקו המדיאלי של העכבר כדי לגשת לחלל החזה.
- ניקוב הסרעפת כדי לפתוח את החלל החזי.
- ויזואליזציה של הריאות והלב לאיסוף דגימות.
תוצאות עיקריות
- שמירה מוצלחת על נפיחות הריאות במהלך הקיבוע.
- יכולת לקבע מספר ריאות בו זמנית.
- דגימות היסטולוגיות יציבות המתאימות להערכה.
- הדגמת הנוהל על ידי סטודנט לתארים מתקדמים.
מסקנות
- הפרוטוקול מספק שיטה אמינה לקיבוע ריאות.
- הוא משפר את איכות ההערכות ההיסטולוגיות במחקר.
- טכניקה זו יכולה להיות מיושמת במחקרים שונים הכוללים פתולוגיה של הריאות.
