成年斑马鱼的口服插管: 一种评价生物活性化合物肠道吸收的模型

这种方法可以帮助回答粘膜疫苗学领域的关键问题，例如肠道粘膜如何吸收生物化合物，以及这些生物在插管后如何调节当地地点的免疫系统。这种技术的主要优点是设置简单，快速，显示低死亡率。这种方法可以提供对粘膜真空学的洞察。

它也可以应用于其他化合物，如化学品、有毒物质或病原体。这种方法的视觉演示是至关重要的，在口腔插管和肠道解剖步骤，你必须小心，因为在插管中，你可能会伤害斑马鱼，并导致死亡。在解剖中，肠末非常细和脆弱。

将大约一厘米的细硅胶管放在 31 规格的 Luer 锁针上。切一个无菌的10微升过滤器移液器尖端，采取更精细的末端，并放在硅胶管作为护套。首先，将针头设备连接到 100 微升的 Luer 锁注射器上。

首先，在实验前一天晚上将鱼转移到实验池。涡旋准备好的纳米粒子溶液，并绘制出所需的悬浮量。安全麻醉鱼后，使用网快速将鱼转移到湿塑料托盘中。

水平定向动物以面对针头。用一只手小心地支撑鱼，用受保护的针头张开嘴。然后，轻轻地将针头插入食道，从开口处插入约一厘米。

很难看出针头应该走多远，这是一个实践问题。当针头找到停止点时，您会感觉到针头，然后通过操作针头，您将找到正确的角度，以插入设备多一点。慢慢地将纳米颗粒悬浮液注入鱼中，确保悬浮液不会向外流过刺或嘴。

在此之后，轻轻取出针头，将鱼放入回收罐中。当鱼恢复时，监测鱼是否有任何异常。一旦鱼恢复，把它返回到一个实验池。

根据文本协议对鱼进行安乐死后，将鱼放在一张滤纸上。使用锋利的解剖剪刀，做一个半圆形切口从阿努斯到手术，并打开切口与精细的钳子。然后，切开肠的两端，取出所有的内脏，并把它们放在滤纸上。

接下来，将肠道与内脏分离，并伸展出来，注意获得所有肠道。最后，用钳子将肠卷在滤纸上，分离粘合剂组织。利用此协议，混合性斑马鱼成功插管不同重组蛋白纳米粒子。

使用自制的口服插管装置，平均死亡率低。为了评估用重组TNFα制造的荧光纳米粒子内含物的传递，进行了细胞学分析。在插管后5小时和24小时，纳米粒子插管组的荧光细胞总量明显高于对照组。

插管设备价格便宜、精确且可重复使用。整个插管过程可以很快由一个操作员完成，而且重要的是，不同运算符之间的方法是一致的。我们的插管方法与下游分析相结合，是口腔疫苗开发的理想之选。