فحص نشاط إندوتوكسين للكشف عن بطانة الدم الكاملة في المرضى الذين يعانون من أمراض خطيرة

يمكن أن يؤدي الإنتان إلى فشل متعدد الأعضاء والموت. إندوتكسين هو عنصر أساسي من البكتيريا السلبية الغرام. قد تحدد مستويات الانتشار المرتفعة من التسمم الداخلي للمرضى المعرضين لخطر أعلى للإصابة بمرض أكثر حدة.

يمكن استخدام مقايسة نشاط إندو السامين كعلامة بيولوجية بسيطة وسريعة وموثوق بها من إندotoxemia النظامية. قد يساعد الكشف المبكر عن هذا السم الأطباء المعالجين الذين يعالجون المرضى الذين يعانون من صدمة تعفن. في المريض الذي يُصاب بصدمة تعفن، قد يدفع التحديد المبكر لحالة سريعة التطور إلى علاج أسرع وأكثر كثافة في دعم الحياة، مما قد يؤدي إلى نتائج أفضل.

إظهار هذا الإجراء سيكون ليزا ماتياسن، عالمة الأحياء الجزيئية التي تتعاون مع مجموعتنا البحثية. لبدء هذا الإجراء، حدد مجموعة اختبار EA وفك خمسة أنواع مختلفة من الأنابيب. استخدام أنبوب رقم واحد، أنبوب التحكم، لقياس النشاط القاعدي للانفجار التأدي غير محددة من العدلات المريض في غياب جسم مضاد معين.

استخدام أنبوب رقم اثنين، أنبوب عينة، لقياس انفجار الأكسدة استجابة لمجمع LPS-الأجسام المضادة. استخدام أنبوب رقم ثلاثة، أنبوب ماكس، لقياس الانفجار التأدي المؤسد القصوى من العدلات المريض استجابة لفائض من endotoxin. استخدام أنبوب رقم أربعة، أنبوب LPS، كمصدر للـ endotoxin الخارجية.

واستخدم الأنبوب رقم خمسة، أنبوب أليكوت، لتخزين الدم. جمع عينات دم المريض في أنابيب معقمة تحتوي على EDTA مضادات التخثر، وتخزينها في درجة حرارة الغرفة قبل تشغيل اختبار EA. قبل البدء في الاختبار، قم بتشغيل مقياس اللبن والحاضنة شاكر وسخّن الحاضنة إلى 37 درجة مئوية.

أولا، ضع أنابيب EA لاستخدامها في رفوف الأنبوب، وإزالة القبعات. استخدام combipipette لنقل ملليلتر واحد من كاشف EA من الزجاجة إلى أنابيب رقم واحد، رقم اثنين، ورقم ثلاثة عن طريق الأنابيب أسفل الجانب من الأنابيب. عكس بلطف أنبوب جمع الدم 20 مرة لخلط عينة دم المريض.

ثم، ماصة 0.5 ملليلتر من دم المريض في أنبوب رقم أربعة وأنبوب رقم خمسة. دوامة أنبوب رقم أربعة لمدة 10 ثوان. ضع رفوف الأنبوب مع جميع أنابيب اختبار EA في حاضنة شاكر.

أغلق الغطاء، وحضن عند درجة حرارة 37 درجة مئوية لمدة 10 دقائق. بعد ذلك، افتح غطاء الحاضنة وأزل رفوف الأنبوب من الشاكر. دوامة أنبوب رقم خمسة.

باستخدام طرف معقمة، ماصة 40 ميكرولترات من الدم في أنابيب رقم واحد ورقم اثنين، في مكررة. أنبوب دوامة رقم أربعة. باستخدام نفس طرف الماصات، نقل 40 ميكرولترات من الدم من أنبوب رقم أربعة إلى أنبوب رقم ثلاثة، في نسخة مكررة.

دوامة ستة أنابيب الاختبار النهائي واحدا تلو الآخر. ضع رفوف الأنبوب مرة أخرى في شاكر احتضان، وإغلاق الغطاء. تعيين شاكر إلى 100 دورة في الدقيقة، وبدء الحركة لمدة 14 دقيقة.

أدخل بطاقة رقاقة EA المسماة في مقياس الشفة، واضغط على ابدأ. بعد الحضانة لمدة 14 دقيقة، اتبع التعليمات المعروضة على مقياس الميل. دوامة بلطف كل أنبوب لمدة 10 ثانية قبل وضعه على حامل العينة من سموميمينتر.

فتح درج العينة، ووضع أنبوب رقم واحد في حامل العينة. ثم أغلق درج العينة وانتظر قراءة وحدة الإضاءة النسبية. كرر عملية القراءة هذه للأنابيب اثنين وثلاثة وجميع التكرارات، كما هو موضح في بروتوكول النص.

بعد أن تتم معالجة جميع الأنابيب، سيتم حساب نتائج EA وطباعتها تلقائيًا. كرر عملية فحص كامل لكل عينة الدم التي تحتاج إلى اختبار. تخزين مجموعة EA فحص ومكوناتها في حزمة مختومة الأصلي في درجة حرارة تتراوح بين درجتين و 25 درجة مئوية.

في هذه الدراسة, يتم إجراء فحص نشاط إند السامين للكشف عن endotoxemia الدم كله في المرضى الذين يعانون من أمراض خطيرة. وتشير قيمة EA التي تقل عن 0.40 وحدة EA إلى انخفاض مستوى نشاط الـ endotoxin، أي ما يعادل تركيز LPS منخفض الانتشار، وهو ما يمثل خطرًا منخفضًا للتقدم إلى حالة مرض حاد. تشير النتيجة التي تتراوح بين 0.40 و 0.59 وحدة EA إلى مستوى نشاط إندوكسيين متوسط، وهو ما يمثل خطرًا متوسطًا للإصابة بتعفن الدم الشديد والصدمات الإنتانية.

تشير النتائج التي تساوي أو تزيد عن 0.60 وحدة EA إلى مستوى نشاط عالي للـ endotoxin ، مما يمثل خطرًا كبيرًا لصدمة الإنتان وضعف نتائج المرضى. الدم من أنابيب رقم أربعة وخمسة يجب أن تكون مختلطة مع أنبوب الاختبار الصحيح. ويجب توخي المزيد من الحذر لاتباع الترتيب الصحيح الوارد في البروتوكول.

يتم تشغيل كل أنبوب في التكرارات، مما قد يؤدي إلى أخطاء في هذه المرحلة. بعد عرضه، وقد اقترح EA Assay كعلامة بيولوجية لطبقة خطر المريض مع نقص ضغط الجهازية. كما أنه قد درس كاختبار فحص لاختيار المرضى لإستراتيجيات متقدمة لعلاج الهيموبوريشن.