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蛍光顕微鏡を使用して競争力のある滴定による転写因子の DNA 結合親和性の高感度測定

JoVE Journal
Bioquímica

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JoVE Journal Bioquímica

High Sensitivity Measurement of Transcription Factor-DNA Binding Affinities by Competitive Titration Using Fluorescence Microscopy

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蛍光顕微鏡を使用して競争力のある滴定による転写因子の DNA 結合親和性の高感度測定

DOI:

10.3791/58763-v

•

06:38 min

•

February 07, 2019

•

Christophe Jung, Max Schnepf, Peter Bandilla, Ulrich Unnerstall, Ulrike Gaul

¹Gene Center and Department of Biochemistry, Center for Protein Science Munich (CIPSM),Ludwig-Maximilians-Universität München

Capítulos

00:04Título
01:00Oligomer Annealing
01:45Gel Preparation
03:35Addition of the Competitor DNA Solution and Image Acquisition
04:41Competitive Titration Assay and the Fitting Procedure
05:17Results: Determining TF-DNA Binding Affinities Using Fluorescence Microscopy
06:07Conclusion

Summary

Tadução automática

大規模な感度を考慮した結合親和性平衡、ソリューションを決定するための手法をご紹介します。これは、転写因子の DNA 結合の定量的解析を向上します。メソッドは、制御された配信システムで自動蛍光異方性測定に基づいています。

Tags

Transcription Factor-DNA Binding Fluorescence Microscopy Dissociation Constant Competitive Titration Anisotropy Measurement Binding Affinity Protein-DNA Interaction DNA Annealing Agarose Gel Titration Plate Calibration Well Nile Blue Dye

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