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Single Liposome Measurements for the Study of Proton-Pumping Membrane Enzymes Using Electrochemistry and Fluorescent Microscopy
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Medidas solo de liposomas para el estudio de enzimas de membrana bombas de protones usando electroquímica y microscopia fluorescente

DOI:
10.3791/58896-v

•

12:15 min

•

February 21, 2019

•

, ,
1School of Biomedical Sciences & the Astbury Centre for Structural Molecular Biology,University of Leeds, 2Department of Chemistry and Nano-Science Center,University of Copenhagen

Capítulos

  • 00:04Título
  • 00:28Preparation of a Lipid/UQ-10/FDLL Mix
  • 01:26Reconstitution of Cytochrome bo3
  • 05:06Fabrication of Semi-Transparent Gold Electrodes and Modification of the Gold Surface with Self-Assembled Monolayer (SAM)
  • 06:07Electrochemical Testing of Proteoliposomes Activity
  • 07:46Detection of Enzymatic Proton Pumping by Fluorescence Microscopy
  • 09:44Results: Liposome Identification and pH Change
  • 11:35Conclusion

Summary

Tadução automática

Tadução automática

Aquí, presentamos un protocolo para estudiar el mecanismo molecular de la translocación de protones a través de membranas lipídica de liposomas sola, usando citocromo bo3 como ejemplo. Combinación electroquímica y microscopia de fluorescencia, cambios en el pH en el lumen de las vesículas individuales, contienen solo o múltiples enzimas, puede ser detectado y analizado individualmente.

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Keywords: Single LiposomeProton-pumpingMembrane EnzymesElectrochemistryFluorescent MicroscopyCytochrome BO3Escherichia ColiUbiquinone 10FDLLMOPS BufferHPTSOGP SurfactantPolystyrene Microbeads

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