超薄聚二甲基硅氧烷微氟化片在保水作用下固定化活线虫个体

此协议的一个优点是蠕虫板易于处理。该表具有防止干燥的功能，使我们能够对活的动物进行微拉姆照射，进行多种行为分析，并长期观察。此蠕虫片中的微流体通道是开放的，因此更容易收集动物。

这些蠕虫片也可以反复使用，使它们更经济。当我们开发这种技术时，我们想用显微镜下微米照射动物的一部分。所以我们需要清晰，非常薄的芯片能够举行动物。

首先，在舞台上放置一张薄透明薄的薄板，用作底盖膜。用扁平钳子轻轻将蠕虫片放在底盖膜上。将至少三滴缓冲液放在 6 厘米未处理的培养皿表面。

然后，从文化盘子里挑选几个成年的C.elegans，用一个普拉蒂娜采摘机。将动物转移到一个液滴与普拉蒂娜采摘器，并允许动物在缓冲液中游泳，以去除任何细菌。将动物用两个单独的液滴清洗，并在另一个液滴中冲洗动物。

接下来，将缓冲液滴放在蠕虫片表面。从缓冲液滴中去除被洗过的动物，并将其转移到虫片上的液滴。使用扁平钳子将 PS 盖膜放在蠕虫片上，然后轻轻地按压从纸片一端到另一端的通道。

或者简单地将动物放入水滴中，用盖膜轻轻密封，使水滴在覆盖和蠕虫片之间扩散，使动物在通道内。通过显微镜检查1-2倍放大倍率的运动，确认动物是否活着。记录动物的位置，并特别记录每个动物被封闭的通道数，以及每个动物在通道中的位置。

要收集固定动物，使用扁平钳子从虫片中去除覆盖膜，然后将 10-15 微升缓冲液滴到包围动物的微流体通道之一。在立体显微镜下，观察动物开始旋转。然后使用普拉蒂娜拾取器拾起游泳的动物，并把它们转移到一个检测板。

在像先前证明的封闭动物之后，用荧光显微镜观察动物身上的荧光点。然后利用视频采集图像钙离子波传播，观察动态活动。将用过的蠕虫片放在六厘米的培养皿上，并在片上放置约 100 微升灭菌的超纯水。

使用戴手套的手指将水铺在床单表面，并清除任何污染物。接下来，使用一次性湿巾去除虫片中的水分。将五毫升70%乙醇分配到培养皿中，并使用戴手套的手指将乙醇涂在蠕虫片上。

最后，在薄板干燥后，将薄片放在无菌培养皿和盖子上。利用本协议，对不同封面电影的适用性进行了调查。用PS薄膜封闭在微流体通道中的对照动物和动物之间的运动性没有显著差异。

相比之下，在封闭在盖玻璃下的动物中，运动性显著降低。用宠物膜封闭的动物的动性也显著下降。仔细选择覆盖膜以密封微流体通道非常重要。

使用该协议，我们评估了不同覆盖膜的适用性，通过运动测定动物三个小时后，片上固定。利用这项技术，我们打算开发一种超薄的可湿芯片，仅用于微米辐照。然而，这些蠕虫表已经用于成像和行为检测，超出其原始应用程序。