Journal
/
Bioquímica
/
Использование в Vitro флуоресценции резонанс передачи энергии для изучения динамики белковых комплексов в масштабе времени миллисекунду
JoVE Journal
Bioquímica
É necessária uma assinatura da JoVE para visualizar este conteúdo.  Faça login ou comece sua avaliação gratuita.
JoVE Journal Bioquímica
Using In Vitro Fluorescence Resonance Energy Transfer to Study the Dynamics Of Protein Complexes at a Millisecond Time Scale
Please note that all translations are automatically generated. Click here for the English version.

Использование в Vitro флуоресценции резонанс передачи энергии для изучения динамики белковых комплексов в масштабе времени миллисекунду

DOI:
10.3791/59038-v

•

10:50 min

•

March 14, 2019

•

, ,
1Department of Biochemistry,Purdue University, 2Department of Botany and Plant Pathology,Purdue University, 3Center for Plant Biology,Purdue University

Capítulos

  • 00:04Título
  • 00:33Designing the FRET Assay
  • 01:12Preparation of Cul1AMC•Rbx1, the FRET Donor Protein
  • 04:42Preparation of FlAsHCand1, the FRET Acceptor Protein
  • 05:18Testing and Confirmation of the FRET Assay
  • 06:08Measuring the Association Rate Constant
  • 07:37Measuring the Dissociation Rate Constant of Cul1•Cand1 in the Presence of Skp•F-box Protein
  • 08:33Results: Dynamics Of Protein Complexes
  • 10:30Conclusion

Summary

Tadução automática

Tadução automática

Белок белковых взаимодействий являются критическими для биологических систем, и исследования кинетики привязки обеспечивают понимание динамики и функции белковых комплексов. Мы описываем метод, который дает количественную оценку кинетических параметров белкового комплекса, с помощью передачи энергии резонансной флюоресценции и остановить поток техники.

Tags

Keywords: FRETProtein ComplexKineticsAssociationDissociationCOL1CAND17-amino-4-methylcoumarinFlASHCell LysisSonicationCentrifugationGlutathione BeadsElutionThrombinBuffer A

Article

Embed

ADICIONAR À PLAYLIST

Usage Statistics

Vídeos Relacionados

check_url/pt/59038?article_type=v

Анизотропию, как флуоресценция инструмента для изучения белок-белковых взаимодействий
check_url/pt/59038?article_type=v

Используя строительные леса, липосом Развести липидами проксимальный белок-белковых взаимодействий<em> In Vitro</em
check_url/pt/59038?article_type=v

Времяразрешенная ионизацией электрораспылением водорода дейтерий Обмен масс-спектрометрии для изучения белка структуры и динамики
check_url/pt/59038?article_type=v

Мелких колориметрические Assays внутриклеточных лактата и пирувата в нематоды Caenorhabditis elegans
check_url/pt/59038?article_type=v

Диссипативных Microgravimetry для изучения динамики привязки фосфолипидного связывая протеин Annexin A2 в твердой поддержке липидов бислоев с помощью кварцевого резонатора
check_url/pt/59038?article_type=v

Флуоресценции колебания спектроскопии Assay белок белковых взаимодействий в ячейке контакты
check_url/pt/59038?article_type=v

Single-step очистка макромолекулярных комплексов с помощью РНК, биотин и фото горные компоновщика
check_url/pt/59038?article_type=v

Мониторинг динамики взаимодействия белок-РНК in vivo при высоком временном разрешении с использованием χCRAC
check_url/pt/59038?article_type=v

Использование флуоресценции с временным разрешением, вызванного белком, для идентификации стабильных локальных конформаций по одному мономеру синуклеина α за раз
check_url/pt/59038?article_type=v

Исследование переноса энергии флуоресценции одной молекулы синтеза белка рибосомы

Read Article