Journal
/
Genética
/
С помощью снайпера Cas9 для сведения к минимуму последствий пробить ТРИФОСФАТЫ Cas9 без потери на цель деятельности через направленной эволюции
JoVE Journal
Genética
This content is Free Access.
JoVE Journal Genética
Using Sniper-Cas9 to Minimize Off-target Effects of CRISPR-Cas9 Without the Loss of On-target Activity Via Directed Evolution
Please note that all translations are automatically generated. Click here for the English version.

С помощью снайпера Cas9 для сведения к минимуму последствий пробить ТРИФОСФАТЫ Cas9 без потери на цель деятельности через направленной эволюции

DOI:
10.3791/59202-v

•

11:37 min

•

February 26, 2019

•

, , ,
1ToolGen

Capítulos

  • 00:04Título
  • 01:45Positive and Negative Screening for Evolving Cas9
  • 04:47Delivery of Cas9 as an RNP with Truncated sgRNA
  • 06:17RNP Delivery
  • 07:27Transfection of Plasmids Encoding Sniper-Cas9 and sgRNA
  • 09:01Targeted Deep Sequencing for the Analysis of On-target and Potential Off-target Sites
  • 09:29Results: Analysis of Sniper-screen, On-target and Off-target Activities
  • 10:37Conclusion

Summary

Tadução automática

Tadução automática

Здесь мы представляем протокол для оптимизации ТРИФОСФАТЫ-Cas9 для достижения более высокой специфичности без потери на цель деятельности. Мы используем подход направленной эволюции называется Снайпер экран чтобы найти мутант Cas9 с желаемыми характеристиками. Снайпер-Cas9 совместим с усеченным сингл руководство РНК и доставки в формате рибонуклеопротеида известных стратегий для достижения выше особенностей.

Tags

CRISPR-Cas9Off-target EffectsDirected EvolutionSniper-Cas9On-target ActivitySpecificityLibrary ScreeningTherapeutic DevelopmentCas9 VariantsY-type Cas9ElectroporationCompetent Cells

Article

Embed

ADICIONAR À PLAYLIST

Usage Statistics

Vídeos Relacionados

check_url/pt/59202?article_type=v&slug=using-sniper-cas9-to-minimize-off-target-effects-crispr-cas9-without

Методика адаптивной лабораторной эволюции микроорганизмов с использованием хемостатическую
check_url/pt/59202?article_type=v&slug=using-sniper-cas9-to-minimize-off-target-effects-crispr-cas9-without

ТРИФОСФАТЫ/Cas9-опосредованной целенаправленной интеграции в естественных условиях с помощью стратегию на основе присоединения гомологии опосредованной конец
check_url/pt/59202?article_type=v&slug=using-sniper-cas9-to-minimize-off-target-effects-crispr-cas9-without

ТРИФОСФАТЫ/Cas9 гена редактирования чтобы сделать условное мутантов из человека малярийного паразита P. falciparum
check_url/pt/59202?article_type=v&slug=using-sniper-cas9-to-minimize-off-target-effects-crispr-cas9-without

Эндогенного белка, пометки в человека индуцированных плюрипотентных стволовых клеток с использованием ТРИФОСФАТЫ/Cas9
check_url/pt/59202?article_type=v&slug=using-sniper-cas9-to-minimize-off-target-effects-crispr-cas9-without

CRISPR/Cas9 Рибонуклеопротеин-опосредовано Точное редактирование генов трубэлектрогенерации
check_url/pt/59202?article_type=v&slug=using-sniper-cas9-to-minimize-off-target-effects-crispr-cas9-without

Представляя ген нокаут непосредственно в Amastigote Этап trypanosoma cruzi Использование CRISPR / Cas9 системы
check_url/pt/59202?article_type=v&slug=using-sniper-cas9-to-minimize-off-target-effects-crispr-cas9-without

Поколение определенных геномных модификаций с использованием CRISPR-CAS9 в стволовых клетках человека
check_url/pt/59202?article_type=v&slug=using-sniper-cas9-to-minimize-off-target-effects-crispr-cas9-without

Исследование транскрипционной роли интронического глушителя RUNX1 от CRISPR/Cas9 Рибонуклеопротеин в острых миелоидных клеток лейкемии
check_url/pt/59202?article_type=v&slug=using-sniper-cas9-to-minimize-off-target-effects-crispr-cas9-without

Идентификация рецепторов поверхности клетки используя Геном-Шкала CRISPR/Cas9 Генетические экраны
check_url/pt/59202?article_type=v&slug=using-sniper-cas9-to-minimize-off-target-effects-crispr-cas9-without

В Vitro Направленная эволюция ограничения Эндонуклеза с более строгой спецификой

Read Article