/
/
In vitro Ubiquitination en Deubiquitinisatie assays van Nucleosomale histonen
É necessária uma assinatura da JoVE para visualizar este conteúdo. Faça login ou comece sua avaliação gratuita.
Capítulos
- 00:04Título
- 01:01GSH-agarose Affinity Purification of the GST-RING1B(1-159)-BMI1 (1-109) E3 Ubiquitin Ligase Complex
- 02:16Purification of the BAP1/DEUBAD (ASXL2) Deubiquitinase Complex
- 04:58Purification of the Nucleosomes from HEK293T Cells
- 07:38Nucleosome Ubiquitination Assay Using BMI1/RING1B E3 Ubiquitin Ligase Complex and In Vitro Nucleosomal H2A DUB Assay Using BAP1/DEUBAD
- 09:05Results: Purification, Ubiquitination, and Deubiquitination
- 10:40Conclusion
Ubiquitination is een post-translationele modificatie die belangrijke rollen speelt in cellulaire processen en nauw gecoördineerd wordt door deubiquitination. Defecten in beide reacties ten grondslag liggen aan menselijke pathologieën. Wij bieden protocollen voor het uitvoeren van Ubiquitination en deubiquitinisatie reactie in vitro met behulp van gezuiverde componenten.
Tags
In Vitro UbiquitinationDeubiquitinationNucleosomal HistonesPurified ComponentsUbiquitination MechanismsDeubiquitination MechanismsEnzyme MutationsHuman DiseaseHigh-throughput ScreeningSmall Molecule InhibitorsTherapeuticsBacteria LysisPMSFAntiprotease CocktailGSH BeadsChromatography ColumnGlutathioneHis-BAP1MBP-DEUBADNickel NTA BeadsImidazole
