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ランデムにおけるRNA免疫沈殿によるRNAタンパク質複合体の足跡の同定、シーケンシング(RIPiT-Seq)

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Genética

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Identification of Footprints of RNA:Protein Complexes via RNA Immunoprecipitation in Tandem Followed by Sequencing (RIPiT-Seq)

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ランデムにおけるRNA免疫沈殿によるRNAタンパク質複合体の足跡の同定、シーケンシング(RIPiT-Seq)

DOI:

10.3791/59913-v

•

09:26 min

•

July 10, 2019

•

Lauren Woodward, Pooja Gangras, Guramrit Singh

¹Department of Molecular Genetics, Center for RNA Biology,The Ohio State University

Capítulos

00:04Título
01:40Cell Harvesting and Formaldehyde Treatment
02:50FLAG Immunoprecipitation and RNase I Digestion
04:09Affinity Elution and Magnetic Bead-antibody Conjugation
05:14Second Immunoprecipitation
06:12RNA Extraction and Analysis
07:51Results: RNA and Protein Yields
08:38Conclusion

Summary

Tadução automática

ここでは、哺乳動物細胞由来のRNA:タンパク質(RNP)複合体の内因性RNA結合部位または「フットプリント」を濃縮するプロトコルを提示する。このアプローチは、RNPサブユニットの2つの免疫沈殿を伴い、したがって、並行してRNA免疫沈殿(RIPiT)と呼ばれています。

Tags

RNA Immunoprecipitation RIPiT-Seq RNA-protein Complexes Epitope-tagged Protein CRISPR Immunoprecipitation RNA Extraction HEK293 Cells RNA Binding Proteins RNA Processing Diseases Neuropathies Cancer

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