É necessária uma assinatura da JoVE para visualizar este conteúdo. Faça login ou comece sua avaliação gratuita.
Capítulos
- 00:04Título
- 00:39Preparation of Crude Mitochondrion from Maize Developing Kernels
- 01:45RNA 5’ Polyphosphatase Treatment and Circularization
- 02:33Reverse Transcription and Normalization
- 03:30PCR Amplification and Determination of Transcript Termini
- 04:34Verification of the cRT-PCR Mapping Results by RNA Gel Blot Hybridization
- 05:00Discrimination of Primary and Processed 5’ Ends
- 05:26Determination of Maize mRNA Termini Using the Circular RT-PCR-based Strategy
- 07:05Conclusion
Vi presenterar en cirkulär RT-PCR-baserad strategi genom att kombinera cirkulär RT-PCR, kvantitativ RT-PCR, RNA 5 ' polyfosfatasbehandling, och Northern blot. Detta protokoll innehåller ett normaliserings steg för att minimera påverkan av instabil 5 ' trifosfat, och det är lämpligt för att diskriminera och kartlägga de primära och bearbetade transkriptioner stabilt ackumulerade i majs mitokondrier.
