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Un protocole amélioré pour purifier et directement mono-biotinylate recombinant BDNF dans un tube pour les études de trafic cellulaire dans les neurones
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1Department of Physiology, Faculty of Biological Sciences,Pontificia Universidad Católica de Chile, 2Department of Molecular and Cellular Biology, Faculty of Biological Sciences, Center for Aging and Regeneration (CARE UC),Pontificia Universidad Católica de Chile, 3Institute of Biomedical Sciences. Faculty of Medicine and Faculty of Life Sciences,Universidad Andrés Bello, 4Department of Neuromuscular Diseases, UCL Queen Square Institute of Neurology and UK Dementia Research Institute at UCL,University College London Campus
Capítulos
- 00:00Introdcution
- 00:48Transfection of HEK293 cells
- 01:49Media Collection and Storage
- 03:02Media Concentration and Purification
- 04:58In vitro Mono-biotinylation Reaction
- 06:01Biotinylation Analysis
- 06:56Visualization of Retrograde Axonal Transport of BDNF-QD in Live Neurons
- 07:58Represetative Results
- 13:17Conclusion
Le BDNF recombinant contenant une séquence Avi (BDNFAvi) est produit dans les cellules HEK293 d’une manière rentable et est purifié par la chromatographie d’affinité. BDNFavi est alors directement mono-biotinylé avec l’enzyme BirA dans un tube. BDNFavi et BDNFavi mono-biotinylés conservent leur activité biologique par rapport au BDNF disponible dans le commerce.
