/
/
الجينات تدق في كريسبر / Cas9 وفرز الخلايا في خطوط الخلايا الماكروفاج و تي
É necessária uma assinatura da JoVE para visualizar este conteúdo. Faça login ou comece sua avaliação gratuita.
Capítulos
- 00:05Introduction
- 00:32Design and Plasmid Construction of sgRNAs Targeting Rosa26 Locus
- 02:28Design and Construction of Targeting Vector as Homologous Recombination Template
- 03:46Electroporation of Macrophage and T Cell Lines
- 07:19Cell Sorting to Isolate Putative Knock-in Cells
- 08:58Screening and Validation of Positive Knock-in Cells
- 10:16Representative Results
- 10:52Conclusion
يستخدم هذا البروتوكول المراسلات الفلورية وفرز الخلايا لتبسيط التجارب في الماكروفاج وخطوط الخلايا التائية. وتستخدم اثنين من البلازميدات لهذه التجارب المبسطة في طرق، وهي CRISPR/Cas9- وDsRed2 التعبير عن البلازميد وplasmid المانحة إعادة التركيب متجانسة التعبير عن EBFP2، والتي يتم دمجها بشكل دائم في مكان Rosa26 في الخلايا المناعية.
