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CRISPR/Cas9 및 대식세포 및 T 세포주에서 세포 분류에 의한 유전자 노크인
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Imunologia e Infecção
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JoVE Journal Imunologia e Infecção
Gene Knock-in by CRISPR/Cas9 and Cell Sorting in Macrophage and T Cell Lines
DOI:

11:32 min

November 13, 2021

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Capítulos

  • 00:05Introduction
  • 00:32Design and Plasmid Construction of sgRNAs Targeting Rosa26 Locus
  • 02:28Design and Construction of Targeting Vector as Homologous Recombination Template
  • 03:46Electroporation of Macrophage and T Cell Lines
  • 07:19Cell Sorting to Isolate Putative Knock-in Cells
  • 08:58Screening and Validation of Positive Knock-in Cells
  • 10:16Representative Results
  • 10:52Conclusion

Summary

Tadução automática

이 프로토콜은 형광 기자 및 세포 분류를 사용하여 대식세포 및 T 세포주에서 노크-인 실험을 단순화합니다. 2개의 플라스미드는 면역 세포에 있는 Rosa26 메뚜기에서 영구적으로 통합되는 EBFP2를 표현하는 EBFP2를 표현하는 상동성 재조합 기증자 플라스미드와 CRISPR/Cas9- 및 DsRed2 표현 플라스미드와 균등하게 재조합 기증자 플라스미드인 이러한 단순화된 노크-인 실험에 사용됩니다.

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