/
/
Hurtige, enzymatiske metoder til forstærkning af minimale, lineære skabeloner til proteinprototyping ved hjælp af cellefrie systemer
É necessária uma assinatura da JoVE para visualizar este conteúdo. Faça login ou comece sua avaliação gratuita.
Capítulos
- 00:05Introduction
- 00:42Amplifying the Gene Fragment via PCR
- 02:21Digestion and Circularization
- 03:28Isothermal Rolling Circle Amplification (RCA)
- 04:28Cell-free Reaction and Subtilisin Assay
- 05:41Results: Protein Expression from the Rolling Circle Amplification (RCA) Templates Using Cell-Free Systems
- 06:49Conclusion
Undersøgelsen beskriver en protokol til oprettelse af store (μg-mg) mængder DNA til proteinscreeningskampagner fra syntetiske genfragmenter uden kloning eller brug af levende celler. Den minimale skabelon fordøjes og rundcialiseres enzymatisk og forstærkes derefter ved hjælp af isotermisk rullecirkelforstærkning. Cell-fri udtryk reaktioner kunne udføres med det unpurified produkt.
