/
/
Kjemisk modifikasjon av Tryptophan-rester i en rekombinant Ca2+-ATPase N-domene for å studere Tryptophan-ANS FRET
É necessária uma assinatura da JoVE para visualizar este conteúdo. Faça login ou comece sua avaliação gratuita.
Capítulos
- 00:03Introduction
- 01:15Determination (in silico) of the ANS and SERCA N‐Domain Interaction
- 03:09Expression and Purification of the Recombinant N‐Domain
- 03:39Monitor the Formation of the ANS‐N‐Domain Complex Based on ANS and N‐Domain Fluorescence Intensity Changes
- 07:38N‐Domain Intrinsic Fluorescence Titration by Trp Chemical Modification with NBS
- 08:43Titrate the NBS Modified N‐Domain with ANS by Recording Fluorescence Spectra at 25°C
- 09:37Evidence of ANS Binding to the Chemically Modified N‐Domain by Excitation at λ = 370 nm
- 10:32Results Overview
- 11:30Conclusions
ANS binder seg til Ca2+-ATPase rekombinant N-domene. Fluorescensspektra viser et FRET-lignende mønster ved eksitasjon ved en bølgelengde på 295 nm. NBS-mediert kjemisk modifikasjon av Trp slukker N-domenets fluorescens, noe som fører til fravær av energioverføring (FRET) mellom Trp-rester og ANS.
