/
/
Химическая модификация остатка триптофана в рекомбинантном N-домене Ca2+-АТФазы для изучения триптофана-ANS FRET
É necessária uma assinatura da JoVE para visualizar este conteúdo. Faça login ou comece sua avaliação gratuita.
Capítulos
- 00:03Introduction
- 01:15Determination (in silico) of the ANS and SERCA N‐Domain Interaction
- 03:09Expression and Purification of the Recombinant N‐Domain
- 03:39Monitor the Formation of the ANS‐N‐Domain Complex Based on ANS and N‐Domain Fluorescence Intensity Changes
- 07:38N‐Domain Intrinsic Fluorescence Titration by Trp Chemical Modification with NBS
- 08:43Titrate the NBS Modified N‐Domain with ANS by Recording Fluorescence Spectra at 25°C
- 09:37Evidence of ANS Binding to the Chemically Modified N‐Domain by Excitation at λ = 370 nm
- 10:32Results Overview
- 11:30Conclusions
ANS связывается с Ca2+-ATPase рекомбинантным N-доменом. Флуоресцентные спектры отображают FRET-подобную картину при возбуждении на длине волны 295 нм. NBS-опосредовавшая химическая модификация Trp гасят флуоресценцию N-домена, что приводит к отсутствию переноса энергии (FRET) между остатком Trp и ANS.
