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スプライシング効率を監視するためのレポーターベースの細胞アッセイ
JoVE Journal
Bioquímica
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JoVE Journal Bioquímica
A Reporter Based Cellular Assay for Monitoring Splicing Efficiency
DOI:

08:53 min

September 15, 2021

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Capítulos

  • 00:04Introduction
  • 00:31Cotransfection of HeLa Cells with the Reporter and U1 Small Nuclear RNA (snRNA) Plasmids
  • 02:0032P-Labeling of Oligonucleotides
  • 02:52Analysis of the Spliced Reporter Transcripts by Primer Extension
  • 03:53Analysis of the Spliced Reporter Transcripts by Fluorescent RT-PCR
  • 05:08Analysis of Variant U1 snRNA Expression by RT-qPCR
  • 05:38Setup and Running of Urea-PAGE Gels
  • 06:27Results: Reporter Based Splicing Efficiency of U1 snRNA Constructs
  • 08:09Conclusion

Summary

Tadução automática

このプロトコルは、スプライシングに対する5'-スプライス部位変異の影響をモニターするためのミニジーンレポーターアッセイを記述し、変異誘発スプライシング阻害のレスキューのためのサプレッサーU1 snRNAを開発する。レポーターおよびサプレッサーU1 snRNA構築物をHeLa細胞で発現させ、スプライシングをプライマー伸長またはRT-PCRによって分析する。

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