/
/
Evaluering af substratubiquitylation af E3 Ubiquitin-ligase i pattedyrcellelysater
É necessária uma assinatura da JoVE para visualizar este conteúdo. Faça login ou comece sua avaliação gratuita.
Capítulos
- 00:05Introduction
- 01:08Cell Culture
- 02:33Cell Transfection
- 03:41Cell Lysis and Immunoprecipitation
- 07:40Results: Specific Polyubiquitylation of UXT-V2-HA Mediated by Fbxo7
- 09:06Conclusion
Vi leverer en detaljeret protokol til et allestedsnærværende assay af et specifikt substrat og en E3 ubiquitin-ligase i pattedyrceller. HEK293T-cellelinjer blev anvendt til proteinoverekspression, det polyubiquitylerede substrat blev oprenset fra cellelysater ved immunoprecipitation og løst i SDS-PAGE. Immunoblotting blev brugt til at visualisere denne posttranslationelle modifikation.
Tags
Keyword Extraction:
Substrate UbiquitylationE3 LigaseMammalian Cell LysatesImmunoprecipitation AssayWestern BlotHuman DiseasesCancerNeurological DisordersE3 Ligase DysregulationHEK293T Cell LineDulbecco’s Modified Eagles MediumFetal Bovine SerumPenicillinStreptomycinL-glutamineTrypsin EDTAPolyethyleneimineOpti-MEM 1 Reduced Serum MediumTransient Transfections
