/
/
Оценка убиквитилирования субстрата убиквитин-лигазой E3 в лизатах клеток млекопитающих
É necessária uma assinatura da JoVE para visualizar este conteúdo. Faça login ou comece sua avaliação gratuita.
Capítulos
- 00:05Introduction
- 01:08Cell Culture
- 02:33Cell Transfection
- 03:41Cell Lysis and Immunoprecipitation
- 07:40Results: Specific Polyubiquitylation of UXT-V2-HA Mediated by Fbxo7
- 09:06Conclusion
Мы предоставляем подробный протокол для анализа убиквитилирования конкретного субстрата и убиквитин-лигазы E3 в клетках млекопитающих. Клеточные линии HEK293T использовали для гиперэкспрессии белка, полиубиквитилированный субстрат очищали от клеточных лизатов иммунопреципитацией и разрешали в SDS-PAGE. Иммуноблоттинг использовался для визуализации этой посттрансляционной модификации.
Tags
Keyword Extraction:
Substrate UbiquitylationE3 LigaseMammalian Cell LysatesImmunoprecipitation AssayWestern BlotHuman DiseasesCancerNeurological DisordersE3 Ligase DysregulationHEK293T Cell LineDulbecco’s Modified Eagles MediumFetal Bovine SerumPenicillinStreptomycinL-glutamineTrypsin EDTAPolyethyleneimineOpti-MEM 1 Reduced Serum MediumTransient Transfections
