La mejora de la denervación renal mitigó la hipertensión inducida por la infusión de angiotensina II

La denervación simpática renal es un tratamiento potencial para la hipertensión, que ha sido probado por muchos ensayos clínicos. Esta técnica denerva los nervios renales de flujo libre sin daño de la arteria renal. Además, es un modelo simple, crítico, repetible y estandarizado.

Demostrando el procedimiento estará Ming Wang, un asistente de laboratorio de mi laboratorio. Comience desinfectando la mesa de operaciones con etanol al 70%, luego ajuste la temperatura de la almohadilla térmica a 37 grados centígrados. Antes de la cirugía, esterilice todos los instrumentos quirúrgicos, incluyendo tijeras microquirúrgicas, pinzas rectas finas, pinzas curvas finas, pinzas hemostáticas, gasas estériles y papel de pesaje a 121 grados centígrados durante 30 minutos.

Después de anestesiar a un ratón macho C57BKL/6 de 14 semanas de edad, retire el vello de la espalda con una afeitadora y luego aplique ungüento veterinario en los ojos para evitar la sequedad. Coloque el ratón sobre una mesa de operaciones en posición dorsal. Deslice y limpie el área afeitada con povidona yodada, seguido de tres toallitas con etanol al 70%.

Usando una hoja de bisturí estéril, haga una incisión de un centímetro perpendicular a la cola detrás de la oreja sobre el omóplato de la pierna delantera. Luego, use un hemostático estéril para hacer un túnel subcutáneo debajo de la piel y cree un bolsillo para la bomba. Inserte suavemente una bomba osmótica llena de angiotensina II en el bolsillo, asegurando suficiente espacio libre para suturar la herida sin estirar la piel.

Suturar el músculo con suturas 6-0 Vicryl interrumpidas y cerrar la piel con suturas de nylon 4-0 interrumpidas. Luego frota y limpia el sitio de la herida con povidona yodada. Coloque todos los instrumentos quirúrgicos en un esterilizador durante 10 segundos y reemplace los guantes estériles entre cirugías.

Supervise el ratón hasta que se haya recuperado por completo. Controle de cerca y observe la cicatrización de heridas al menos dos veces al día durante la primera semana y una vez al día posteriormente, incluyendo enrojecimiento, hinchazón e infección. Realice la disección inmediatamente si el ratón muere durante la infusión de angiotensina II.

Mida la presión arterial al inicio y cada semana después de la infusión de angiotensina II con el método de pletismografía del manguito de la cola en ratones conscientes. Una semana después de la infusión de angiotensina II, seleccione los ratones con presión arterial elevada y registre su peso. Elija animales con un peso mínimo de 24 gramos para la cirugía de denervación renal.

A continuación, retire los pelos del abdomen de un ratón anestesiado con una afeitadora, luego coloque el mouse en la mesa de operaciones. Mantenga el abdomen hacia arriba y fije las extremidades con cinta adhesiva. Desinfecte la piel abdominal con povidona yodada, seguido de tres toallitas con etanol al 70%.

Después de hacer una incisión abdominal ventral de dos centímetros en la línea media, tire hacia atrás del intestino con una gasa empapada en solución salina de 37 grados centígrados para exponer la arteria renal izquierda. Con cuidado, pero sin rodeos, diseccione la grasa lejos de la arteria renal usando pinzas curvas. Con unas tijeras afiladas estériles, corte el papel de pesaje en un rectángulo del mismo tamaño que la arteria renal.

Corte varios trozos del papel de pesaje a la vez para mantener la misma forma. Sumerja el papel de pesaje en una solución de etanol de fenol al 10% durante al menos 30 segundos. Cubra la superficie de la arteria renal izquierda y envuelva el vaso con el papel de pesaje durante dos minutos.

Use una gasa para proteger los tejidos circundantes para evitar que el papel de pesaje toque el riñón y el intestino. Repita el mismo procedimiento para la arteria renal derecha. Después de la cirugía, vuelva a colocar los músculos en su posición inicial y cierre el peritoneo con suturas Vicryl 6-0 en un patrón de sutura interrumpida, luego cierre la piel con suturas de nylon 4-0 interrumpidas.

Controle a todos los ratones hasta que estén completamente recuperados. Se observó un aumento significativo de la presión arterial sistólica una semana después de la infusión de angiotensina II. El grupo de angiotensina II de denervación simpática renal, o RDN, mostró una reducción significativa en la presión arterial sistólica en comparación con el grupo de angiotensina II simulada a los 21 días después del procedimiento RDN.

No se observaron diferencias significativas entre los grupos simulados y RDN a las dos semanas después del procedimiento RDN. Aquí se muestra la tinción con hematoxilina y eosina del nervio simpático renal y la arteria renal. No se observó engrosamiento de la capa íntima de la arteria renal en los cuatro grupos.

En comparación con el grupo de simulacros, núcleos fragmentados y picnóticos, se observó digestión e hinchazón del tejido endoneurial en ambos grupos de RDN. La inmunohistoquímica de los haces nerviosos reveló que la expresión de tirosina hidroxilasa disminuyó significativamente en el grupo RDN y RDN angiotensina II en comparación con ambos grupos simulados. El contenido de norepinefrina cortical renal en los riñones denervados tanto en el grupo normotenso como en el hipertenso se redujo significativamente en comparación con el riñón inervado.

La tinción de Masson no mostró un aumento notable en la íntima media de la aorta abdominal entre los grupos. Aquí se muestran imágenes representativas del miocardio en diferentes grupos. La hipertrofia cardíaca inducida por infusión de angiotensina II mejoró con el tratamiento con RDN por la disminución de la fibrosis intersticial y el tamaño de los cardiomiocitos.

Durante el procedimiento, no toque el fenol en el tejido circundante, excepto en la arteria renal, ya que puede causar obstrucción intestinal, infección abdominal y estenosis de la arteria renal. Este método puede establecer un modelo estandarizado de RDN para ayudar a estudiar los mecanismos que controlan la hipertensión. Las aplicaciones futuras de esta técnica pueden contribuir a ampliar las vías que subrayan el proceso de hipertensión e hipertrofia cardíaca.