Journal
/
Bioquímica
/
Måling af proteinomsætningshastigheder i senescerende og ikke-delende dyrkede celler med metabolisk mærkning og massespektrometri
JoVE Journal
Bioquímica
This content is Free Access.
JoVE Journal Bioquímica
Measurement of Protein Turnover Rates in Senescent and Non-Dividing Cultured Cells with Metabolic Labeling and Mass Spectrometry

Måling af proteinomsætningshastigheder i senescerende og ikke-delende dyrkede celler med metabolisk mærkning og massespektrometri

DOI:
10.3791/63835-v

•

08:52 min

•

April 06, 2022

•

, ,
1Laboratory of Genetics and Genomics, National Institute on Aging Intramural Research Program,National Institutes of Health, 2Translational Gerontology Branch, National Institute on Aging Intramural Research Program,National Institutes of Health

Capítulos

  • 00:05Introduction
  • 00:58Labeling of Cells Pulsed SILAC and Harvest of Lysates
  • 02:29In-Solution Trypsin Digestion and Sample Clean-Up with Solid-Phase Extraction (SPE)
  • 04:15Data-Dependent Acquisition Mass Spectrometry Analysis and Calculation of Protein Half-Lives
  • 06:31Results: Measurement of Protein Turnover Rates in Senescent and Non-Dividing Cultured Cells Using pSILAC Mass Spectrometry
  • 08:13Conclusion

Summary

Tadução automática

Tadução automática

Denne protokol beskriver arbejdsgangen for metabolisk mærkning af senescerende og ikke-delende celler med pulserende SILAC, ikke-målrettet massespektrometrianalyse og en strømlinet beregning af proteinhalvingstider.

Tags

Protein TurnoverSenescent CellsNon-dividing CellsMetabolic LabelingMass SpectrometrySILACProtein HomeostasisCellular StressAgingNeurodegenerative DiseaseLC-MSTrypsinUreaAmmonium BicarbonateDithiothreitolIodoacetamide

Article

Embed

ADICIONAR À PLAYLIST

Usage Statistics

Vídeos Relacionados

Sheathless kapillarelektroforese-massespektrometri for Metabolic profilering biologiske prøver

Time-løst elektrosprayioniserings Brint-deuterium Exchange-massespektrometri til at studere proteiners struktur og Dynamics

Løsning affinitetsrensede proteinkomplekser ved Blå Native PAGE og protein Korrelation Profilering

Massespektrometri og luminogent tilgange til Karakterisere Fase I Metabolisk Kompetenceudvikling af<em> In vitro</em> Cell Cultures

Prøveforberedelse til massespektrometri-baseret identifikation af RNA-bindende regioner

Dyb proteomet profilering af Isobar mærkning, omfattende væskekromatografi, massespektrometri og Software-assisteret kvantificering

Korrekturlæsning og DNA reparation analyse ved hjælp af Single Nucleotide udvidelse og MALDI-TOF-massespektrometri analyse

Måling og fortolke ilt forbrug satser helt flyve hoved segmenter

Analyse af proteinfoldning, Transport og nedbrydning i levende celler af radioaktivt puls Chase

Påvisning af proteinubiquitinationssteder ved peptidberigelse og massespektrometri

Read Article