Journal
/
Bioengenharia
/
In vitro Seleção de Repressores Transcricionais Projetados para Silenciamento Epigenético Direcionado
JoVE Journal
Bioengenharia
This content is Free Access.
JoVE Journal Bioengenharia
In Vitro Selection of Engineered Transcriptional Repressors for Targeted Epigenetic Silencing

In vitro Seleção de Repressores Transcricionais Projetados para Silenciamento Epigenético Direcionado

DOI:
10.3791/64403-v

•

10:44 min

•

May 05, 2023

•

, , , , , , ,
1San Raffaele Telethon Institute for Gene Therapy (SR-Tiget),IRCCS San Raffaele Scientific Institute, 2Center for Omics Sciences,IRCCS San Raffaele Institute, 3Institute for Biomedical Technologies,National Research Council, 4Vita-Salute San Raffaele University

Capítulos

  • 00:05Introduction
  • 01:34Engineering a Fluorescence-Based Reporter Cell Line
  • 03:10Designing gRNAs for CRISPR/dCas9-Based Epigenetic Silencing of Target Gene
  • 04:13Arrayed Transient Delivery of CRISPR/dCas9-Based ETRs in Reporter Cell Line
  • 07:19Analyzing Transcriptional Activity of Target Gene Over Time
  • 08:11Results: dCas9 ETR-Mediated Epigenetic Silencing of Human B2M Gene by gRNAs
  • 09:23Conclusion

Summary

Tadução automática

Tadução automática

Aqui, apresentamos um protocolo para a seleção in vitro de repressores transcricionais projetados (ETRs) com alta, longa duração, estável, eficiência de silenciamento no alvo e baixa atividade fora do alvo em todo o genoma. Esse fluxo de trabalho permite reduzir um repertório inicial e complexo de ETRs candidatos a uma lista curta, adequada para avaliação adicional em cenários terapeuticamente relevantes.

Tags

Keywords: Epigenetic SilencingGene SilencingArtificial NucleasesEngineered Transcriptional RepressorsChromatin CompactionTranscriptional InhibitionGene DisruptionRNA InterferenceB2M GeneCRISPR Cas9Nucleofection

Article

Embed

ADICIONAR À PLAYLIST

Usage Statistics

Vídeos Relacionados

check_url/pt/64403?article_type=v

Extração de lipídeos celulares para Targeted diluição de isótopos estáveis ​​Líquido Análise Espectrometria de Massa-Cromatografia
check_url/pt/64403?article_type=v

Técnica Cirúrgica para a Implantação de engenharia de tecidos enxertos vasculares e Subsequente<em> In Vivo</em> Monitoring
check_url/pt/64403?article_type=v

Produção, Caracterização e usos potenciais de uma mucosa esofágica Modelo 3D Human Tissue-engenharia
check_url/pt/64403?article_type=v

Irritação dos olhos Test (EIT) para identificação de perigos de olho irritantes químicos usando reconstruída Humano Córnea-like epitelial (RHCE) Modelo Tissue
check_url/pt/64403?article_type=v

Projetado retalho do músculo vascularizada
check_url/pt/64403?article_type=v

A Tissue Combinada 3D Engineered<em> In Vitro</em> /<em> In Silico</em> Modelo de tumor de pulmão para prever a eficácia da droga em fundos específicos de mutação
check_url/pt/64403?article_type=v

Targeted Plasma Membrane entrega de um hidrofóbica Carga encapsulado em um cristal líquido nanopartículas Transportador
check_url/pt/64403?article_type=v

A<em> In Vitro</em> Modelo Cultura Órgão da Murino Intervertebral Disc
check_url/pt/64403?article_type=v

Produção de geneticamente modificados Hamsters sírios dourados por injeção pró-nuclear do complexo CRISPR/Cas9
check_url/pt/64403?article_type=v

Reprimir a transcrição do Gene redirecionando maquinaria celular com modificadores epigenéticas químicas

Read Article