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Uma Análise Pull-Down Quantitativa Otimizada de Proteínas Ligadoras de RNA Usando RNA Biotinilado Curto
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JoVE Journal Bioquímica
An Optimized Quantitative Pull-Down Analysis of RNA-Binding Proteins Using Short Biotinylated RNA

Uma Análise Pull-Down Quantitativa Otimizada de Proteínas Ligadoras de RNA Usando RNA Biotinilado Curto

DOI:
10.3791/64923-v

•

07:55 min

•

February 17, 2023

•

, , , ,
1Center for Human Technology,Italian Institute of Technology (IIT), 2Department of Experimental Oncology,European Institute of Oncology (IEO), 3Department of Biology and Biotechnologies ‘Charles Darwin’,Sapienza University of Rome

Capítulos

  • 00:05Introduction
  • 00:42Total Protein Harvest and Protein Concentration Determination
  • 01:48Bead Preparation
  • 03:12Bead Loading and Protein Binding on Beads
  • 04:13Washing of Nonspecific Binders
  • 04:53Elution of Specific Binders
  • 05:39Results: Quantification and Validation of Protein Interactors of Specific RNA Sequences
  • 07:24Conclusion

Summary

Tadução automática

Tadução automática

Aqui, apresentamos um método in vitro otimizado para descobrir, quantificar e validar interatores proteicos de sequências específicas de RNA, usando extrato proteico total de células humanas, esferas de estreptavidina revestidas com RNA biotinilado e análise por espectrometria de massas.

Tags

Keywords: RNA-binding ProteinsPull-down AnalysisBiotinylated RNAProtein ComplexesHEK 293T CellsLysis BufferMagnetic BeadsYeast TRNARNA Oligonucleotide

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