É necessária uma assinatura da JoVE para visualizar este conteúdo. Faça login ou comece sua avaliação gratuita.
1Centro de Biología Celular y Molecular de Enfermedades,Instituto de Investigaciones Científicas y Servicios de Alta Tecnología (INDICASAT-AIP), 2Departamento de Medios y Creativo,Instituto de Investigaciones Científicas y Servicios de Alta Tecnología (INDICASAT-AIP), 3Sistema Nacional de Investigación-Secretaría Nacional de Ciencia,Tecnología e Innovación (SNI-SENACYT)
Capítulos
- 00:04Introduction
- 00:27Amplification and Insertion of the eGFP Gene into the pLEXSY‐2.1 Vector
- 02:39Linearization of the pLEXSY Expression Plasmid
- 03:26Transfection of L. panamensis and L. donovani by Electroporation
- 05:00Polyclonal Selection in Culture
- 06:41Confirmation of Genomic Integration
- 07:09Cloning by Limiting Dilution
- 08:12Results: Confirmation of eGFP Cassette Expression and Chromosomal Insertion
- 09:40Conclusion
यहां, हम पीएलईएक्सएसवाई प्रणाली का उपयोग करके एक स्थिर एकीकृत ट्रांसजीन के रूप में ईजीएफपी के लिए जीन को व्यक्त करने वाले एल पैनामेंसिस और एल डोनोवानी उपभेदों को उत्पन्न करने के लिए उपयोग की जाने वाली पद्धति का वर्णन करते हैं। ट्रांसक्रिप्टेड परजीवियों को कमजोर पड़ने को सीमित करके क्लोन किया गया था, और दोनों प्रजातियों में उच्चतम प्रतिदीप्ति तीव्रता वाले क्लोन को ड्रग स्क्रीनिंग परख में आगे उपयोग के लिए चुना गया था।
