É necessária uma assinatura da JoVE para visualizar este conteúdo. Faça login ou comece sua avaliação gratuita.
1Centro de Biología Celular y Molecular de Enfermedades,Instituto de Investigaciones Científicas y Servicios de Alta Tecnología (INDICASAT-AIP), 2Departamento de Medios y Creativo,Instituto de Investigaciones Científicas y Servicios de Alta Tecnología (INDICASAT-AIP), 3Sistema Nacional de Investigación-Secretaría Nacional de Ciencia,Tecnología e Innovación (SNI-SENACYT)
Capítulos
- 00:04Introduction
- 00:27Amplification and Insertion of the eGFP Gene into the pLEXSY‐2.1 Vector
- 02:39Linearization of the pLEXSY Expression Plasmid
- 03:26Transfection of L. panamensis and L. donovani by Electroporation
- 05:00Polyclonal Selection in Culture
- 06:41Confirmation of Genomic Integration
- 07:09Cloning by Limiting Dilution
- 08:12Results: Confirmation of eGFP Cassette Expression and Chromosomal Insertion
- 09:40Conclusion
В данной работе описывается методология получения штаммов L. panamensis и L . donovani , экспрессирующих ген eGFP в виде стабильного интегрированного трансгена с использованием системы pLEXSY. Трансфицированных паразитов клонировали путем предельного разведения, а клоны с самой высокой интенсивностью флуоресценции у обоих видов были отобраны для дальнейшего использования в скрининговых анализах на наркотики.
