I denne protokol beskriver vi de tekniske procedurer til generering af brune fedtvæv (BAT)-specifikke knockout-mus, der udnytter et kombineret Cre-LoxP-, CRISPR-Cas9- og adeno-associeret virus (AAV) single-guide RNA (sgRNA) system. De beskrevne trin omfatter design af sgRNA'erne, fremstilling af AAV-sgRNA-partiklerne og mikroinjektion af AAV i BAT-loberne.