Визуализация витальных и невитальных перицитов головного мозга в срезах мозга после субарахноидального кровоизлияния
August 18th, 2023
Предварительное расследование подтверждает, что субарахноидальное кровоизлияние (САК) вызывает гибель перицитов головного мозга. Оценка сократительной способности перицитов после САК требует дифференциации жизнеспособных и нежизнеспособных перицитов головного мозга. В связи с этим была разработана процедура одновременной маркировки жизнеспособных и нежизнеспособных перицитов головного мозга в срезах мозга, что облегчает наблюдение с помощью конфокального микроскопа высокого разрешения.
Наше исследование показало значительное увеличение смертности перицитов. Таким образом, начиная с больной лошади после САК, она продемонстрировала положительную корреляцию между количеством низкожизнеспособных паразитов и временем, прошедшим после САК. Визуализация жизненно важных и невитальных паразитов мозга в срезах мозга после САК и методов изоляции паразитов продвинула исследования в моей области.
В настоящее время довольно сложно полностью отличить мертвых паразитов от мертвых эндотелиальных клеток. В нашем исследовании был обнаружен сократительно-зависимый апоптоз у паразитов после САК. Мы разработали очень надежный протокол, который позволяет флуоресцентно маркировать, как функциональных, так и нефункциональных паразитов мозга в отделах мозга, и в одно и то же время.
View the full transcript and gain access to thousands of scientific videos
Обзор
Это исследование изучает влияние субарахноидального кровотечения (САК) на перициты мозга, подчеркивая механизмы гибели клеток перицитов и их контрактильности. Был разработан модель с использованием срезов головного мозга крыс для различения жизнеспособных и нежизнеспособных перицитов. Такой подход позволяет использовать высокоразрешающее изображение для оценки жизнеспособности перицитов после САК.
Ключевые компоненты исследования
Область науки
- Нейробиология
- Цитология
- Иммунофлюоресцентная микроскопия
Предыстория
- Известно, что субарахноидальное кровотечение (САК) вызывает гибель перицитов мозга.
- Понимание жизнеспособности перицитов после САК важно для раскрытия нейроваскулярного повреждения.
- Существующие методы не могут адекватным образом различать жизнеспособные и нежизнеспособные перициты.
- Новые методы визуализации необходимы для наблюдения изменений перицитов при САК.
Цель исследования
- Оценить контрактильность перицитов и их жизнеспособность после САК.
- Разработать надежный протокол для одновременного маркирования жизнеспособных и нежизнеспособных перицитов.
- Усовершенствовать методы визуализации для лучшего наблюдения за поведением перицитов в срезах мозга.
Использованные методы
- В качестве ex vivo модели для исследования перицитов использовались срезы головного мозга крыс.
- САК индуцировали путем введения аутологической крови в супрасельную цISTERNу у наркотизированных крыс.
- В исследовании использовали иммунофлюоресцентные методы для маркирования перицитов и оценки их жизнеспособности.
- Ключевые этапы включали инкубацию с флуоресцентными красителями и исследования с использованием конфокальной микроскопии.
- Были соблюдены временные рамки для оценки жизнеспособности перицитов в различные часы после САК.
Основные результаты
- Исследование выявило значительное увеличение гибели перицитов, начинающееся через шесть часов после САК.
- Была выявлена положительная корреляция между количеством нежизнеспособных перицитов и временем после САК.
- Механистически, после САК наблюдалась апоптоз, зависящий от контракции, у перицитов.
- Жизнеспособные перициты были идентифицированы наряду с нежизнеспособными вариантами с помощью флуоресцентных методов маркировки.
Выводы
- Это исследование демонстрирует надежный метод для различения жизнеспособных и нежизнеспособных перицитов после САК.
- Результаты улучшают понимание динамики перицитов в нейроваскулярных реакциях на повреждения.
- Результаты могут быть применимы к пониманию нейроваскулярных повреждений при различных патологиях мозга.
Часто задаваемые вопросы
Chapters in this video
0:00
Introduction
1:06
Induction of the Murine Subarachnoid Hemorrhage Model and Brain Slice Preparation for Fluorescent Imaging
2:05
Labeling and Staining Rat Brain Pericytes for Fluorescent Imaging
3:40
Confocal Imaging of Vital and Non‐Vital Pericytes in Rat Acute Brain Slices
