인도에 대한 수술 배아 줄기 세포 – 파생 허혈성 hindlimb에 내피 세포가 bioluminescence 이미징에 의해 비침습 추적, 증명합니다.
Abstract
다리와 발에 산소를 혈액과 영양소를 공급 주변 동맥이 좁아에서 주변 동맥 질환 (PAD) 결과,이 병리 같은 간헐 claudication (도보로 통증), 고통스러운 허혈성 ulcerations, 심지어 사지 위협 괴저와 같은 증상을 초래합니다. 이것은 일반적으로 혈관 내피 모든 혈액과 림프 혈관의 luminal 표면을 투자 내피 세포 monolayer이 혈관 항상성 및 혈관 재생에 지배적인 역할을 것으로 생각됩니다. 그 결과, 내피의 세포 기반의 재생을 막기위한 것이 PAD 치료를위한 유망한 접근법 수 있습니다.
이 비디오에서는, 우리는 배아 줄기 세포 (ESC)의 이식을 보여주 파생 bioluminescence 이미징에 의해 유도 세포 및 생존의 비침습 추적 다음 PAD의 모델로 일방적 hindimb 국소 빈혈의 치료에 대한 내피 세포를. 세포 전달 및 이미징에 대한 구체적인 자료와 절차가 설명됩니다. 이 프로토콜은 니이야마 외 의해 hindlimb 국소 빈혈의 유도를 설명하는 다른 간행물을 준수 1.
Protocol
1. 내피 세포에 murine ESCs의 분화 내피 세포에 ESCs을 차별에 대한 프로토콜은 다른 설명이 프로토콜 2,3의 초점이 아닙니다. 간단히, 세포가 차별 허용, 그리고 CD31 또는 혈관 내피 cadherin (VE – cadherin)로 내피 표시 양성 반응 세포는 다음 형광 활성 세포 분류 (외과)에 의해 정화하고 있습니다. 2. 더블 퓨전 리포터 유전자와 Lentiviral 도입 구축 Bioluminesce…
Discussion
ESCs 때문에 차별과 내피 세포를 포함한 세 세균 레이어를 구성하는 세포 lineages을 일으키다 능력 그들의 소성의 조직 국소 빈혈의 치료를 위해 유망한 전지 소스입니다. ESCs과 관련된 윤리적 문제를 극복하기 위해 유도 pluripotent 줄기 세포 (iPSCs) 윤리 문제를 극복 대안 pluripotent 줄기 세포 원천 수 있습니다. ESCs 게다가, 이러한 내피 전구 세포 (EPCs) 및 조혈 줄기 세포 (HSCs)와 같은 성인 줄기 세포도 사용할 수 있지?…
Acknowledgements
저자 안드레아 액스텔, 사토시 이토, MD, 제프 Velotta, MD, 그랜트 호이트, 로버트 C. 로빈스, MD, 진 유, MD, 팀 도일, 박사, 그리고 기술 지원을위한 스탠포드 작은 동물 이미징 핵심 주셔서 감사합니다. 저자는 또한, 수의 장비의 지원을 오전 비크포드 (주) 감사합니다. 이 연구는 국립 보건원에서 연구 기금 (R01 HL – 75774, R01 CA098303, R21 HL085743, 1K12 HL087746), 캘리포니아 대학 (15IT – 0257 및 1514RT – 0169)의 캘리포니아 담배 관련 질병 연구 프로그램에 의해 지원되었다 및 재생 의료 (RS1 – 00183)의 캘리포니아 연구소.
NH는 미국 심장 협회에서 친교에 의해 지원됩니다. 심장 협회 수 있습니다.
Materials
Material Name
Type
Company
Catalogue Number
Comment
Surgical tools
Tool
Fine Science Tools
Syringe needle
Tool
BD
28G insulin syringe is preferred
Phosphate Buffered Saline
Reagent
Invitrogen
D-luciferin
Reagent
Biosynth International, Inc
Prepare D-luciferin in advance into filtered stock solutions of 15 mg/mL in PBS
IVIS 200 Bioluminescence imaging system and acquisition software
Huang, N. F., Niiyama, H., De, A., Gambhir, S. S., Cooke, J. P. Embryonic Stem Cell-Derived Endothelial Cells for Treatment of Hindlimb Ischemia. J. Vis. Exp. (23), e1034, doi:10.3791/1034 (2009).