Dit protocol wordt beschreven hoe u immunohistochemie uit te voeren op ontleed Drosophila larve.
Een abonnement op JoVE is vereist om deze inhoud te bekijken. Log in of start vandaag met uw gratis proefperiode.
Methodenartikel
Drosophila larven NMJ Immunohistochemie
In dit artikel
Samenvatting
Protocol
Voordat u begint
- Bereid de volgende oplossingen: PBT (0,1% Triton X100 in 1X PBS), PBTB (0,2% BSA in PBT), en PBTN (2% NGS in PBTB).
- Ontleden Drosophila larven. Zie Drosophila larven NMJ Dissection.
Immunohistochemie
- Verplaats de larven naar een 1,5 ml buisje met PBT. Twee keer was de larven gedurende 15 minuten in de PBT. Opmerking: om te wassen, de 1.5 ml buis op een nutator mixer. Verwijder de vloeistof met een pippetor en vervangen door verse vloeistof.
- Verwijder de PBT. Twee keer wassen in PBTB gedurende 30 minuten.
- Verwijder de PBTB. Twee keer wassen....
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Discussie
Immunohistochemie (IHC) is van vitaal belang voor de studie van de NMJ biologie, omdat het in staat stelt visualisatie van de NMJ. Dit wordt bereikt door met behulp van antilichamen die de neuronale membraan (bijv. HRP), de presynapse (bijv., CSP, SYT), en / of de postsynapse (bijvoorbeeld DLG) te erkennen. Signaalmoleculen, structurele eiwitten, of nieuwe eiwitten van belang kunnen ook worden gekleurd. Dan kunnen genen worden gemuteerd of missexpressed, en IHC kan verstoring van synaptische structuur en / of neuronale .......
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Materialen
| Naam | Bedrijf | Catalogusnummer | Opmerkingen |
|---|---|---|---|
| Stereomicroscoop “Stemi” 2000 | Carl Zeiss, Inc. | 495101-9804-000 | |
| Lichtbron KL 1500 LCD | Carl Zeiss, Inc. | 000000-1063-181 | |
| Dumont SS pincet | Fine Science Tools | 11200-33 | |
| Dumont #5 pincet | Fine Science Tools | 11252-20 | |
| Adams™ nutatormenger | BD Biosciences | 421105 | |
| Precisionmes nr. 1 | X-Acto | 3201 | |
| Messen nr. 16 | X-Acto | 216 | |
| ProLong Gold antifade-reagens | Invitrogen | 36930 |
Referenties
- Jan, L. Y., Jan, Y. N. Properties of the larval neuromuscular junction in Drosophila Melanogaster. J. Physiol. 262, 189-214 (1976).
- Johansen, J., Halpern, M. E., Johansen, K. M., Keshishian, H. Stereotypic morphology of glutamatergic synapses on ident....
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Herprints en machtigingen
