Il raggiungimento di alta qualità e la quantità appropriata di isole umane è uno dei presupposti importanti per il trapianto di isole pancreatiche di successo. In questo video, si descrive passo dopo passo le procedure per l'isolamento delle isole pancreatiche umane (I parte: la digestione e la raccolta di tessuto pancreatico) utilizzando un metodo modificato automatizzato.
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Articolo metodologico
Isolamento delle isole pancreatiche umane: Parte I: Digestione e Collezione di tessuto pancreatico
In questo articolo
Sommario
Abstract
Gestione del diabete di tipo 1 è onerosa, sia per l'individuo e la società, che costano oltre 100 miliardi di dollari all'anno. Nonostante l'uso diffuso di monitoraggio della glicemia e insulina formulazioni nuove, molte persone ancora sviluppare devastanti complicanze secondarie. Trapianto di isole pancreatiche in grado di ripristinare nei pressi di controllo normale del glucosio in pazienti diabetici
Protocollo
1. Programma di setup
- Isolamento isole umane è una procedura momento delicato che coinvolge il lavoro di squadra e, quindi, quattro individui sono necessarie per condurre questa procedura. Il team è guidato dal chirurgo, che analizza e cannulates il pancreas.
- L'isolamento delle isole inizia il minuto la squadra entra nel UIC di isolamento delle isole. I membri del team in modo che tutta la strumentazione necessaria, come la centrifuga, viene controllata e acceso. Inoltre assicuratevi di disinfettare tutte le cappe e superfici.
- Due persone si impostare la tabella incannulazione, granitore, circuito digestione, unità di perfusione, ma....
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Discussione
Ci sono una varietà di fattori che influenzano il risultato dell'isolamento 9,10. Tra questi, la digestione del tessuto pancreatico gioca un ruolo di primo piano. Sulla base della nostra esperienza umana isolamento delle isole, abbiamo riassunto i seguenti punti critici, che potrebbe potenzialmente influenzare il rendimento delle isole e la qualità.
- Il tempo di digestione è diversa quando i diversi tipi di enzimi sono utilizzati.
- Non appena il 40-50% delle isole completamente separate dal tess.......
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Ringraziamenti
Supportato da un finanziamento della University of Illinois a Chicago, nonché delle cellule delle isole Resource Center NIH di sovvenzione (RFA-RR 05-003), la Fondazione Cristoforo, la Fondazione Efroymson, e la Fondazione Tellabs.
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti | |
|---|---|---|---|---|
| Macchina per Slush di Ghiaccio | attrezzatura | Taylor Company | K4036546 | produrre ghiaccio sterile |
| Centrifuga | attrezzatura | Beckman Coulter Inc. | 424803 | |
| Microscopio Invertito MZ6 TLBD4.1 | attrezzatura | Leica Microsystems | 4103 | |
| Piatto per Coltura Cellulare con Griglia da 2 mm | attrezzatura | Nalge Nunc international | 174926 | conteggio degli isolotti |
| Bagno Termoregolato Digitale EX7 | attrezzatura | NesLab | 105361058 | |
| Termometro | attrezzatura | IBI:IR | 60444 | |
| Bilancia MonoBloc AB 104-S | attrezzatura | Mettler Toledo | 1119430864 | misurare il peso del pancreas |
| Regolatore di Velocità MasterFlex II | attrezzatura | Cole-Parmer | J00006445 | regolare la velocità di flusso durante la digestione |
| Digital Sight DS L1 | attrezzatura | Nikon Instruments | 217267 | |
| Unità di Perfusion | attrezzatura | Prodotto su Misura | n/a | |
| Refrigeratore per unità di perfusione | attrezzatura | Fisher Scientific | 3013P | |
| Camera di Ricordi | attrezzatura | University of Miami | n/a | |
| Soluzione di Diluizione RPMI | reagente | Mediatech, Inc. | 99783024 | |
| Soluzione dell'Università del Wisconsin (UW) | reagente | DURAMED | 1000-46-06 | |
| Soluzione Salina Tamponata di Hank’s (HBSS) | reagente | Mediatech, Inc. | 99-597-CM | |
| Albumina Umana al 25% | reagente | GRIFOLS | NDC 61953-0002-2 | |
| Mezzo M199 (soluzione di lavaggio) | reagente | Mediatech, Inc. | 99-784-CM | |
| Collagenasi NB1 di grado GMP | reagente | SERVA Electrophoresis | N0002937 | |
| Proteasi Neutra NB1 di grado GMP | reagente | SERVA Electrophoresis | N0002936 | |
| Betadine | reagente | Cardinal Health | 29906-004 | |
| Cefazolina | reagente | West-Ward Pharmaceutical | NDC 0143-9924-90 | |
| Ditizone | reagente | Sigma-Aldrich | D5130 |
Riferimenti
- Shapiro, A. M., et al. Islet transplantation in seven patients with type 1 diabetes mellitus using a glucocorticoid-free immunosuppressive regimen. N Engl J Med. 343, 230-238 (2000).
- Nano, R., et al.
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Ristampe e permessi
