Micromanipulatie van de gistcellen is nodig voor de meiose genetische analyse of om diploïde zygoten te selecteren. Deze micromanipulations worden uitgevoerd met behulp van de microneedle van een dissectie microscoop. De microneedle wordt gebruikt om de cellen te verplaatsen en wordt gecontroleerd door een micromanipulator die beschikbaar zijn met een verschillende mate van automatisering.
Abstract
Gist is een zeer soepel model systeem dat wordt gebruikt om veel verschillende cellulaire processen te bestuderen. De gemeenschappelijke stam laboratorium<em> Saccharomyces cerevisiae</em> Bestaat in ofwel een haploide of diploïde staat. De mogelijkheid om allelen combineren van twee haploiden en de mogelijkheid om wijzigingen aan te brengen van het genoom vergt de productie en de ontleding van ASCI. ASCI productie van haploïde cellen begint met de paring van twee gist haploïde stammen met compatibele voortplantingstypes tot een diploïde stam te produceren. Dit kan worden bereikt op een aantal manieren, hetzij op vast medium of in de vloeistof. Is het voordelig om te kiezen voor de diploïden in medium dat selectief hun groei bevordert ten opzichte van een van de haploïde stammen. De diploïden worden dan toegestaan om sporulate op voedselarme medium om ASCI, een bundel van vier haploïde dochtercellen als gevolg van meiotische reproductie van de diploïde vorm. Een mengsel van vegetatieve cellen en asci wordt vervolgens behandeld met het enzym zymolyase te verteren weg het membraan zak rond de ascosporen van de ASCI. Met behulp van micromanipulatie met een microneedle onder een microscoop een dissectie kan ophalen individuele ASCI en aparte en verplaats de vier ascopores. ASCI ontleed worden gekweekt voor meerdere dagen en getest voor de markers of allelen van een belang door replica uitplaten op geschikte selectieve media.
Protocol
Bouw van diploïde stammen Protocol voor de productie van diploïden door voortplanting De initiële stammen moeten worden geslagen op YPD, of selectief medium, indien nodig, om enkele kolonies te produceren. De twee haploïde stammen moeten zijn van tegengestelde mating type (dwz Mata en MATα). Met behulp van een steriele enting lus kies een klein deel van een kolonie van een van de twee haploïde stammen. Op een nieuwe plaat YPD streep de lus een keer in een rechte lijn over de plaat. Mark…
Discussion
Gist dissectie is een nuttig instrument om nieuwe stammen te selecteren met de gewenste markers. Bij het bepalen van de theoretische groeipatroon van vier ascosporen is het belangrijk om te kijken naar het genotype van het vegetatieve cel. Als er een plasmide aanwezig is, moet men weten of het is single, laag of hoog te kopiëren, omdat dit zal invloed hebben op die ascospore (s) het plasmide ontvangen en zullen van invloed zijn voorspellingen en de conclusies ten aanzien van de stammen wordt gemanipuleerd.
<p class…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Werk in het laboratorium van de auteur wordt gefinancierd door de Canadese Institutes of Health Research, de Canada Foundation for Innovation, het Natural Sciences and Engineering Research Council en Concordia University.