Method Article

Isolatie van Protoplasten uit weefsels van 14-dagen-oude zaailingen van Arabidopsis thaliana

DOI:

10.3791/1149

⸱

August 17th, 2009

 ,  , 
1Crop and Soil Sciences, Cornell University

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Deze video toont een procedure voor het isoleren van intacte protoplasten uit weefsels van 14-dagen-oude zaailingen van Arabidopsis. Gezien het feit dat de geïsoleerde protoplasten intact blijven gedurende minstens 96 uur en worden geïsoleerd van zaailingen in plaats van een-maand-oude volwassen planten, deze procedure versnelt assays die intact protoplasten.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Protoplasten zijn plantaardige cellen die hebben hun celwanden enzymatisch verwijderd. Isolatie van protoplasten van verschillende weefsels plant werd voor het eerst meer dan 40 jaar geleden gemeld

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Deel 1. Bereiding van vaste medium voor het kweken van planten.

We meestal cultuur planten op geconcentreerd Murasige en Skoog (MS) medium, aangevuld met 1% sucrose en 0,7% agar. Het bevat alle noodzakelijke ingrediënten om planten gezond te houden.

Ter voorbereiding van 1L van MS, media pH 5,7

  1. Voeg 2,15 g van MS poeder in 800 ml water in 1.5-2.0L autoclaveerbaar fles.
  2. Plaats een roerstaaf in de fles en los MS poeder door roeren medium op een bewogen plaat.
  3. Al roerend, toe te voegen, druppel voor druppel, 1N KOH om de pH van MS medium aan te passen naar 5,7.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Om ervoor te zorgen de hoge opbrengst van intacte protoplast is het heel belangrijk om weer te beginnen met gezonde planten. Gebruik filter-steriliseren-oplossingen voor het isoleren van protoplasten. Vergeet niet dat protoplasten kwetsbaar zijn. Daarom, wanneer u protoplasten hanteren, niet mengen, pipet of vortex ze krachtig, omdat het hen zal remmen. In plaats daarvan, mix protoplasten door langzaam draaiende of taping de centrifugebuis. De beschreven procedure opbrengst intact protoplasten die levensvatbaar zijn voo.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

De voorlopige patent beschrijft deze procedure voor gebruik ervan in functionele analyses van plantaardige genen zijn gedeponeerd bij Cornell Centrum voor Technologie Enterprise en commercialisering (CCTEC), juni 2008. Docket Geen 50341/015001: Vatamaniuk, OK, en Zhai, Z. methode voor een snelle functionele analyses van plantaardige genen.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Dit werk werd ondersteund door de Cornell University Agricultural Experiment Station (CUAES) NYC-125433 Hatch Grant en Cornell Start-Up Grant toegekend aan OKV

....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
MurashigeandSkoogBasalSaltMixture(MS)Sigma-AldrichM5524
AgarSigma-AldrichA1296
PetriDishes(100x15mm)Krackeler Scientific, Inc.82-4001
Cellulase(OnozukaR‐10)Research Products International Corp.C32200
Macerozyme(R10)Research Products International Corp.M22010
CheeseclothwipesFisher Scientific06-665-29
LabRotatorFisher Scientific1167152Q
AllegraX‐15RCentrifugeVWR international392932
Axioskop2PlusMicroscopeCarl Zeiss, Inc.

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Cocking, E. C. A Method for the Isolation of Plant Protoplasts and Vacuoles. Nature. 187, 962-963 (1960).
  2. Chen, S., Halkier, B. A. Characterization of glucosinolate uptake by leaf protoplasts of Brassica napus. J Biol Chem. 275, 22955-22960 (2000).

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Protoplast IsolationArabidopsis SeedlingsEnzyme DigestionSucrose Density GradientCheesecloth FiltrationCell Wall RemovalProtoplast YieldW Five SolutionHemocytometer CountingTissue Slicing

Related Articles