접근 시냅스에 전기 생리학의 응용 프로그램 시냅스 돌연변이를 분석에 유용 시냅스 활동의 같지는 조치를 제공합니다. 이 문서 신경근육학 분기점 (NMJ)의 노출하는 데 사용되는 절개 방법을 설명합니다 Caenorhabditis 엘레간스 (C. 엘레간스) 그리고 잠시이 준비가 적용할 수있는 수있는 사용의 일부를 설명합니다.
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이 논문에서
요약
초록
Neurotransmission는 뉴런이 빠른 시간 척도에 그들의 포스트 시냅스 목표로 화학 신호를 통해 정보를 전송하는 과정입니다. 이 복잡한 과정은 적절한 시냅스 연결, 전기 신호의 전도, 타겟팅 및 분비의 vesicles, 칼슘 감지, 소포의 융합, 현지화 및 postsynaptic 수용체의 기능 마중물을 보장하기 위해 많은 사전 및 사후 시냅스 단백질의 조정 활동이 필요하고 마지막으로, 재활용 메커니즘. neuroscientists로서 그것은 다음과 같이 각 기능을하는 단백질 명료하게하다와 행동 그들의 메커니즘을 이해하는 우리의 목표입니다. 시냅스에서 Electrophysiological 녹음 시냅스 전송 중에 발생하는 근본적인 전기 사건의 밖으로 읽기 같지는를 제공합니다. 분자와 유전 도구의 강력한 배열과 C로 시냅스 단백질을 조작 가능한이 기술을 결합하여 엘레간스, 우리는 시냅스 전달의 결과 기능 변화를 분석할 수 있습니다.
C. 엘레간스는 모터 신경 및 신체 벽 근육 제어 운동이 시냅스 1 따라서, uncoordinated locomotory phenotypes UNC (S라고도 함)와 돌연변이가 자주 교란 시냅스 전송 사이에 형성 NMJs. UNC의 돌연변이 세균 음식 소스의 풍부한 공급 유지되기 때문에, 그들은 음식을 알아보는 몇 가지 pharyngeal 펌핑 능력을 보유만큼 가능한 남아 있습니다. 이 같이 사실과 그 C. 엘레간스가 나온것과 같은 존재, 그들은 정교한 짝짓기 행동에 대한 필요없이 돌연변이 자손에 전달할 수 있습니다. 이러한 특성은 NMJs 2,3,7 정확히 어떻게 UNC 돌연변이의 영향 neurotransmission 주소로하는이 훌륭한 모델 유기체를 만드는 벌레에서 기록하기 위해 최근 기능과 결합.
절개 방법은 NMJs를 노출 웜 표피에 절개를하기 위해 cyanoacrylic 접착제를 사용하여 immobilizing 성인 웜을 포함됩니다. C. 이후 엘레간스 성인은 절개가 해부 현미경의 사용과 수행 및 뛰어난 판단력을 필요로합니다 길이에서만 1mm입니다. NMJ 레코딩은 전체 세포 개별 바디 벽 근육 세포 및 신경 전달 물질 자료를 클램핑 전압 전기 자극 광 - 활성화된 채널 rhodopsin - 중재 탈분극 4 될 모든 중 hyperosmotic 호수를 포함하여 자극 프로토콜의 다양한 사용 evoked 수에 의해 만들어진 간단히 설명했다.
프로토콜
해부에 사용되는 도구 A. 준비.
- 해부 / 녹음 챔버 : 우리가 일반적으로 22mm 직경 원형 덮개 유리를 수용할 수있을만큼 충분히 큰 것을 중심으로 몰락 원형 구멍, 1 / 16 일 인치 자석 시트 밖으로 우리의 기록 챔버를 구성. 챔버의 외부 크기는 레코딩을 할하는 데 사용되는 현미경 무대에 따라 달라집니다. 자성 시트의 뒷면에, 우리는 커버의 각 모서리에 낮게 녹아 Paraplax 조직 삽입 왁스의 펠렛을 배치하여 챔버를 준수 48 X 60mm 커버 슬립을 첨부 유리와 챔버 사이에 끼워 넣으면 슬립 . 그것이 지속적인 레이어 gluing 챔버에 커버 슬립을 형성 때까지 왁스 그런 다음, 유리 플레이트가 직면하고, 뜨거운 접시에 녹아있다. 왁스 빨리 녹으로이 단계는 무인 두지 마십시오. 챔버 제거하고 즉시 그 밀랍이 녹아서가로 냉각해야합니다. 22mm 원형 구멍의 안쪽 가장자리를 따라 새어가 초과 왁스는 면도날 에지를 사용하여 제거할 수 있습니다.
- Sylgard - 코팅 커버 풀렸는데 : 해부가 22mm, 녹화 챔버의 원형 캐비티 내에 배치됩니다 Sylgard - 코팅 커버 슬립에 수행됩니다. Sylgard 코팅은 cyanoacrylic 접착제가 다운 또한 웜은가 연결되면 접착제 피펫 팁을 다시 부수하는 쿠션 역할을 할 때 glu....
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토론
유전자 모델 생물 C, 엘레간스은 이상적으로 시냅스 단백질을 인코딩 유전자에 돌연변이의 기능 분석을 통해, 시냅스 전달의 연구에 가장 적합합니다. 여기서 우리는 C를 렌더링 절개 기법을 설명했습니다 엘레간스는 electrophysiological 분석을위한 접근 NMJs. 함께 비디오 C.에서 중요한 단계를 모습 엘레간스 해부와 시냅스 활동을 측정하는 데 사용되는 일반적인 레코딩 구성. 이 방법을 학습의 가장 큰 도전을 제기 세 단계는 다음과 같습니다, 1) 웜 gluing 단계, 2) 성공적인 절개를 수행하고, 본문 벽의 근육에 3) 패치. 이들은 마스터되고 나면,이 준비 중 전압 또는 전류 클램프 - 클램프 모드에서 포스트 시냅스 근육의 기록 의무가 있습니다. evoked 자극에 응답은 쉽게 돌연변이 배경의 다양한이 해부하는 준비를 사용하여 측정할 수 있습니다. 야생 형 성인 웜 (길이 1 ㎜)의 이미 분 크기를 감안할 때, 성인기에 도달하거나.......
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감사의 글
이 문서는 제리에 NIH의 부여에 의해 투자되었다. 나는 기록 데모 중 하나를 사용 cholinergic 모터 뉴런의 채널 rhodopsin을 표현 형질 벌레를 제공하는 닥터 알렉스 고츠쵸크 감사하고 싶습니다.
....액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.
참고문헌
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