चेचक वायरस के संक्रमण और वायरस जीन एक्सप्रेशन के टेम्पोरल विश्लेषण: भाग 2
Summary
चेचक संक्रमण और कोशिकाओं मेजबान और वायरल जीन की अभिव्यक्ति के HeLa के विश्लेषण के लिए प्रोटोकॉल. 3 के भाग 2.
Abstract
परिवार<em> Poxviridae</em> बड़े डबल असहाय डीएनए वायरस है कि संक्रमित कोशिकाओं के cytoplasm में विशेष रूप से को दोहराने वाले होते हैं. के सदस्य<em> Orthopox</em> जीनस शामिल शीतला, मानव चेचक की प्रेरणा का एजेंट, monkeypox, और चेचक (VAC), वायरस परिवार के prototypic सदस्य. अपेक्षाकृत बड़े (~ 200 केबी) चेचक जीनोम के भीतर जीनों के तीन वर्गों में इनकोड किया गया है: जल्दी, मध्यवर्ती, और देर. जबकि सभी तीन वर्गों virally इनकोडिंग शाही सेना पोलिमेरासिज़ द्वारा लिखित हैं, प्रत्येक वर्ग वायरस के जीवन चक्र में एक अलग समारोह में कार्य करता है. Poxviruses संक्रमण के दौरान मेजबान सेलुलर पर्यावरण के मॉडुलन के लिए कई रणनीतियों का उपयोग. आदेश में समझने के लिए दोनों मेजबान और वायरस के जीन अभिव्यक्ति के विनियमन के लिए, हम जीनोम चौड़ा दृष्टिकोण का उपयोग किया है दोनों वायरस और मेजबान कोशिकाओं से प्रतिलेख बहुतायत का विश्लेषण. यहाँ, हम समय चेचक वायरस और नमूने शाही सेना के साथ कई बार के बाद संक्रमण बिंदुओं पर HELA कोशिकाओं के पाठ्यक्रम संक्रमण प्रदर्शित करता है. दोनों मेजबान और वायरल कुल शाही सेना और अलग है और जीन अभिव्यक्ति के विश्लेषण के लिए प्रोटीन के संकरण के लिए प्रवर्धित.
Protocol
Discussion
गंभीर कदम
प्रवर्धन के एक दूसरे दौर सरणी डेटा में biases के रूप में देखा गया है की सलाह नहीं दी है. प्रत्येक enzymatic कदम (1 सेंट और 2 एन डी कतरा सीडीएनए संश्लेषण, IVT) पर ध्यान मिश्रण अच्छा प्रवर्धन प?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
व्हाइटहेड संस्थान अध्येता फंड
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Amino Allyl MessageAmp II aRNA amplification kit | Reagent | Applied Biosystems | AM1753 | For 20 reactions |
| Amino Allyl MessageAmp II aRNA amplification kit | Reagent | Applied Biosystems | AM1821 | For 100 reactions, in a 96-well format |
| NanoDrop ND-1000 UV-VIS spectrophotometer | Other | NanoDrop | ND-1000 | Or equivalent spectrophotometer |
References
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