Le système nerveux stomatogastric (STNS) du crabe nordique ( C. boréales) Peut être utilisé pour l'électrophysiologie, l'immunohistochimie, et les études de culture cellulaire. L'extraction STNS se fait en deux parties: la dissection fine et globale.
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Article de méthode
Cancer borealis Stomatogastric dissection du système nerveux
Dans cet article
Résumé
Résumé
Le ganglion stomatogastric (STG) est un excellent modèle pour étudier les interactions cellulaires et le réseau, car il contient un nombre relativement restreint de cellules (environ 25 en C. borealis) qui sont bien caractérisés. Les cellules de la STG présentent un large éventail de sorties et sont responsables de l'action motrice de l'estomac. L'estomac contient le moulin gastrique qui décompose les aliments avec trois dents internes, et le pylore qui filtre la nourriture avant qu'elle atteigne l'intestin moyen. Le STG produit deux sorties rythmiques pour contrôler le moulin gastrique et le pylore connue en tant que générateurs motif central (GPC). Chaque cellule dans la STG peuvent participer à l'une ou l'autre de ces rythmes. Ces GPC permettre l'étude de la neuromodulation, l'homéostasie, la variabilité cellulaire et réseau, développement du réseau, et la reprise du réseau.
La dissection du système nerveux stomatogastric (STNS) du crabe nordique (Cancer borealis) se fait en deux parties: la dissection fine et globale. Dans la dissection brute de l'estomac entier est disséqué du crabe. Pendant la dissection fines du STNS est extraite de l'estomac à l'aide d'un microscope de dissection et de micro-dissection des outils (voir figure 1). Le STNS comprend les STG, le ganglion œsophagien (OG), et les ganglions commissuraux (CG) ainsi que les nerfs qui innervent les muscles du ventre. Ici, nous montrons comment effectuer une dissection complète de l'STNS en préparation pour une expérience électrophysiologie où les cellules dans la STG seraient enregistrées à partir intracellulaire et les nerfs périphériques seraient utilisées pour des enregistrements extracellulaires. La bonne technique pour trouver les nerfs désirée est affichée, ainsi que notre technique de dégainage le ganglion de révéler le soma et le neuropile.
Protocole
1. Dissection brut
- Placer un crabe sur la glace pendant 30 minutes pour ternes les systèmes sensoriels et moteurs de l'animal. L'entourent sur tous les côtés avec de la glace. Les gants doivent être portés lors de la manipulation du crabe.
- Préparez-vous à la dissection brute en posant la poêle dissection et les outils que vous allez utiliser. Rongeurs, os de coupe ciseaux, petits ciseaux, pince à griffes, une spatule avec un bord effilé, un noir Sylgard revêtement plat, et les broches d'insectes sont nécessaires.
- Retirer le crabe du seau à glace par sa patte arrière pour l'empêcher de pincement et le placer dans la casse....
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Discussion
La dissection STNS est la première étape dans l'exécution d'une expérience ou électrophysiologie immunohistochimie, ou pour obtenir des cellules pour la culture cellulaire. Indépendamment de l'expérience prévue, la dissection brute restera inchangée. Cependant, la dissection fine peut varier. Il est important de planifier à l'avance du temps que les cellules des nerfs et qui vous enregistrer. La plupart des neurones dans la STG ont des processus qui innervent les muscles au moins un dans l'estomac (v.......
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Remerciements
Nous remercions sincèrement les membres du Laboratoire Marder. Nous remercions notre conseiller, la Dre Eve Marder, pour son soutien et ses encouragements. Cette recherche a été financée par l'Institut national des troubles neurologiques et des maladies Subventions NS-17813 et NS-058 110.
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Matériaux
| Nom | Entreprise | Numéro de catalogue | Commentaires | |
|---|---|---|---|---|
| Sylgard noir 170 | Autre | Dow Corning | 170 | Dissection macroscopique |
| Ciseaux fins | Chirurgie | Fine Science Tools | 14090-09 | |
| Épingles à insectes taille 6 | Chirurgie | Fine Science Tools | 26000-65 | |
| Ciseaux de Mayo | Chirurgie | Fine Science Tools | 14110-17 | |
| Micro-spatule | Chirurgie | WARD’s Natural Science | 15 V 4313 | |
| Rongeurs | Chirurgie | Fine Science Tools | 16000-14 | |
| Pinces à tissus | Chirurgie | Fine Science Tools | 11021-12 | |
| Fil fin en tungstène (diamètre 0,001 po) | Chirurgie | California Fine Wire Company | Dissection fine | |
| Pinces n°5 | Chirurgie | Fine Science Tools | 91150-20 | |
| Minuten Pins | Chirurgie | Fine Science Tools | 26002-10 | |
| Ciseaux à ressort Moria (lames de 7 mm) | Chirurgie | Fine Science Tools | 15370-52 | |
| Boîte de Pétri (100x15 mm) | Autre | Fisher Scientific | 08-757-12 | |
| Support pour épingles | Chirurgie | Fine Science Tools | 26018-17 | |
| Pinces super fines n°5SF | Chirurgie | Fine Science Tools | 11252-00 | |
| Sylgard 182 | Autre | Dow Corning | 182 | |
| Aiguilles en tungstène | Chirurgie | Fine Science Tools | 10130-05 | |
| Microscope stéréoscopique | Microscope | Wild | MC3 | Divers |
| Crabe Jonah (C. borealis) | Animal | Commercial Lobster |
Références
- Harris-Warrick, R. M., Marder, E., Selverston, A. I., Moulins, M. Dynamic Biological Networks: The stomatogastric nervous system. , MIT Press. Boston. (1992).
- Marder, E., Bucher, D. Understanding circuit dynamics using the stomatogastric nervous system of lobsters and crabs.<....
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Réimpressions et autorisations
