Cancer Borealis Stomatogastric nervsystemet Dissection
Summary
Det stomatogastric nervsystemet (STNS) av krabbtaska (<em> C. borealis</em>) Kan användas för elektrofysiologi, immunohistokemi, och cellkulturstudier. Den STNS utvinning sker i två delar: de grova och fina dissekering.
Abstract
Den stomatogastric ganglion (STG) är en utmärkt modell för att studera cellulära och nätverk interaktioner eftersom den innehåller ett relativt litet antal celler (ca 25 i C. borealis) som är väl karakteriserade. Cellerna i STG uppvisar ett brett utbud av utgångar och är ansvariga för motorn åtgärder i magen. Magen innehåller mag kvarnen som bryter ner maten med tre interna tänder och pylorus som filtrerar maten innan den når midgut. De STG producerar två rytmiska utgångar för att styra mag-kvarnen och pylorus kallas central mönsterritare (CPGs). Varje cell i STG kan delta i ett eller båda av dessa rytmer. Dessa CPGs göra det möjligt att studera neuromoduleringsteknik, homeostas, cellulär och nätverk föränderlighet, utveckling av nätet och nätverk återhämtning.
Dissekering av de stomatogastric nervsystemet (STNS) från krabbtaska (Cancer borealis) görs i två delar, de grova och fina dissekering. I grova dissektion hela magen är dissekeras från krabba. Under den fina dissektion av STNS utvinns från magen med en dissektion mikroskop och mikro-dissektion verktyg (se figur 1). I STNS ingår STG, det matstrupen ganglion (OG) och commissural ganglierna (COG) såväl som de nerver som innerverar magen muskler. Här visar vi hur du utför en fullständig dissekering av STNS inför en elektrofysiologi experiment där de celler i STG skulle spelas in från intracellulärt och perifera nerver skulle användas för extracellulärt inspelningar. Den rätta tekniken för att hitta önskad nerverna visas samt vår teknik desheathing de ganglion att avslöja somata och neuropil.
Protocol
Discussion
Den STNS dissektion är det första steget för att utföra en elektrofysiologi eller immunohistokemi experiment, eller för att få celler för cellodling. Oavsett den avsedda experiment kommer bruttomarginalen dissektion förblir oförändrade. Dock får den fina dissektion variera. Det är viktigt att planera i förväg vilka celler och vilka nerver du kommer att spela in från. De flesta nervceller i STG har processer som innerverar minst en muskel i magen (se figur 2) och klassificeras enligt deras innerveras mål….
Acknowledgements
Vi erkänner tacksamt medlemmar i Marder Lab. Vi tackar vår handledare, Dr Eva Marder, för hennes stöd och uppmuntran. Denna forskning stöds av National Institute of neurologiska sjukdomar och stroke Grants NS-17.813 och NS-058.110.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Black Sylgard 170 | Other | Dow Corning | 170 | Gross Dissection |
| Fine Scissors | Surgery | FST | 14090-09 | |
| Insect Pins size 6 | Surgery | FST | 26000-65 | |
| Mayo Scissors | Surgery | FST | 14110-17 | |
| Micro-Spatula | Surgery | Ward Sci. | 15 V 4313 | |
| Rongeurs | Surgery | FST | 16000-14 | |
| Tissue Forceps | Surgery | FST | 11021-12 | |
| Fine Tungsten Wire (0.001 in. diameter) | Surgery | California Fine Wire | Fine Dissection | |
| Forceps #5 | Surgery | FST | 91150-20 | |
| Minuten Pins | Surgery | FST | 26002-10 | |
| Moria Spring Scissors (7mm blades) | Surgery | FST | 15370-52 | |
| Petri Dish (100x15mm) | Other | Fischer | 08-757-12 | |
| Pin Holder | Surgery | FST | 26018-17 | |
| Super fine forceps #5SF | Surgery | FST | 11252-00 | |
| Sylgard 182 | Other | Dow Corning | 182 | |
| Tungsten Needles | Surgery | FST | 10130-05 | |
| Dissecting Microscope | Microscope | Wild | MC3 | Misc. |
| Jonah Crab (C. borealis) | Animal | Commercial Lobster |
References
- Harris-Warrick, R. M., Marder, E., Selverston, A. I., Moulins, M. . Dynamic Biological Networks: The stomatogastric nervous system. , (1992).
- Marder, E., Bucher, D. Understanding circuit dynamics using the stomatogastric nervous system of lobsters and crabs. Annu. Rev. Physiol. 69, 291-316 (2007).
- Maynard, D. M., Dando, M. R. The structure of the stomatogastric neuromuscular system in Callinectes sapidus, Homarus Americanus and Panulirus argus (Decapoda crustacean). Philos. Trans. R. Soc. Lond. B Biol. Sci. 268 (892), 161-220 (1974).
- Selverston, A. I., Russell, D. F., Miller, J. P. The Stomatogastric Nervous System: Structure and function of a small neural network. Prog. Neurobiology. 7, 215-290 (1976).
