格罗斯和精细解剖内耳感觉上皮细胞在成年斑马鱼（斑马鱼）
Summary
成年斑马鱼的内耳感觉上皮是一个良好的模型系统，为了解在成年脊椎动物的毛细胞再生的机制。此协议表明的上皮细胞的精细解剖，我们可以通过它获得组织样本，研究在细胞和亚细胞水平的再生事件。
Abstract
感觉神经上皮细胞在内耳的听觉和平衡功能的关键结构。因此，重要的是了解，这主要是两种类型的细胞组成的上皮细胞和分子特征：毛细胞（HCS）和支持细胞（SCS）。在这里，我们选择研究的内耳感觉上皮细胞在成年斑马鱼不仅的上皮结构，因为在所有研究的脊椎动物是高度保守的，但也因为成年斑马鱼能够再生HCS，有能力的哺乳动物出生后失去不久。作为一个模型系统，研究可能有助于为临床治疗人类慧聪损失的听觉/平衡赤字的成年脊椎动物内耳HC再生机制，我们使用的成年斑马鱼的内耳。
在这里，我们将演示如何在成年斑马鱼的内耳感觉上皮的毛保费及精细解剖。总清扫删除周围的内耳组织，并准备组织切片，这使得我们可以研究的感觉上皮细胞的详细结构。罚款清扫清理每一个人的上皮细胞的非感觉上皮组织，使我们能够在整个安装的上皮细胞样本研究整个上皮细胞的异质性很容易。
Protocol
第1部分：组织准备安乐死的成年斑马鱼缓冲的MS – 222（甲酸乙酯3 – 氨基磺酸盐，0.03％）。 杀头的鱼。切断下颌，头部腹侧的夹层垫，带虫针固定的组织。取出头骨腹软组织和一双细镊子显微镜下解剖，打开颅骨囊腹侧部分。 鱼头中的多聚甲醛（4％），固定在4 ° C过夜。 在PBS冲洗固定鱼嘴（磷酸盐缓冲液，1X）3次，每次5分钟。 第2部分：内耳?…
Discussion
在这个协议中，我们描述的内耳感觉上皮细胞的成年斑马鱼，研究的感官上皮细胞和亚细胞的功能，使我们准备组织样本的总罚款清扫。
为了开展一个成功的解剖，第一步，固定的，是非常重要的。确保您始终使用新鲜配制的多聚甲醛溶液，因为旧的解决方案将导致是很难处理过程中剥离的组织下，固定。但是，请确保您不要过度修复组织，由他们留在固定时间过长的解决?…
Acknowledgements
这项研究是由国家人类基因组研究所，美国国立卫生研究院院内研究计划的支持。
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| MS222 (Ethyl 3-aminobenzoate methanesulfonate salt) | Reagent | Sigma | A5040 | |
| PBS (Phosphate-buffered Saline, 10X) | Reagent | Mediatech | 46-013-CM | |
| Paraformaldehyde | Reagent | Sigma | P-6148 | |
| Triton X-100 | Reagent | Sigma | T8787 | |
| Alexa Fluor 488 phalloidin | Reagent | Invitrogen | A12379 | |
| VECTASHIELD Hard Set Mounting Medium with DAPI | Reagent | Vector Laboratories | H-1500 | |
| Dissection microscope | Microscope | Nikon | SMZ1000 | |
| Insect pins | Tool | Fine Science Tools | 26000-40 | |
| Scissors | Tool | Roboz | RS-5880 | |
| Tweezers | Tool | Roboz | RS-5045 | |
| Needle blade | Tool | Sharpoint | 78-6810 | |
| Fluorescent microscope | Microscope | Zeiss | Axiovert 200M | |
| Dissection pad | Tool | eNasco | SB07840M | |
| Zebrafish | Animal | various | n/a |
Cite This Article
Liang, J., Burgess, S. M. Gross and Fine Dissection of Inner Ear Sensory Epithelia in Adult Zebrafish (Danio rerio). J. Vis. Exp. (27), e1211, doi:10.3791/1211 (2009).