Summary

माउस फेफड़े के ऊतकों से सिंगल सेल निलंबन gentleMACS Dissociator का उपयोग मानकीकृत तैयार

Published: July 02, 2009
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Summary

विशिष्ट प्रकार के ऊतकों से अलग कोशिकाओं ऊतक आंदोलन के लिए विशिष्ट मानकों व्यवहार्य, कृषि कोशिकाओं की एक उच्च मात्रा प्राप्त करने के लिए की आवश्यकता है. Miltenyi gentleMACS dissociator एक सरल, व्यावहारिक प्रोटोकॉल के साथ इस कार्य का अनुकूलन. इस प्रकाशन में फेफड़े के ऊतकों पर इस उपकरण का उपयोग समझाया जाता है.

Abstract

ऊतकों से एकल कक्ष निलंबन की तैयारी सेलुलर अनुसंधान के क्षेत्र में कई प्रयोगों के लिए एक महत्वपूर्ण शर्त है. पूरे अंगों को अलग करने की प्रक्रिया के क्रम में विशिष्ट मापदंडों की आवश्यकता है एक प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य तरीके में व्यवहार्य कोशिकाओं के एक उच्च संख्या प्राप्त करने के लिए. gentleMACS Dissociator एक सरल, व्यावहारिक प्रोटोकॉल के साथ इस कार्य का अनुकूलन कर. साधन पूर्व क्रमादेशित सेटिंग है कि माउस फेफड़ों सहित ऊतक प्रकार की एक किस्म के कुशल लेकिन कोमल हदबंदी के लिए अनुकूलित कर रहे हैं शामिल हैं. इस प्रकाशन में फेफड़ों चूहों से व्युत्पन्न ऊतक पर gentleMACS Dissociator के उपयोग के प्रदर्शन है.

Protocol

बाँझ शर्तों के तहत काम करने के लिए, यह एक लामिना का प्रवाह हुड में सभी चरणों का पालन करने के लिए सिफारिश की है. 1. माल HEPES बफर: 10 मिमी HEPES NaOH 7.4 पीएच, 150 मिमी NaCl, 5 मिमी KCl, 1 मिमी 2 MgCl, 1.8 मिमी 2 CaCl) Colla…

Discussion

इस वीडियो में, हम माउस फेफड़े के ऊतकों के पृथक्करण के लिए एक नई विधि का परिचय. हम बताते हैं कि फेफड़े के ऊतकों के यांत्रिक और enzymatic उपचार के संयोजन व्यवहार्य leukocytes और endothelial कोशिकाओं के एक उच्च प्रतिशत मिले. वि?…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

लेखकों Miltenyi बायोटेक GmbH, जर्मनी के कर्मचारी हैं.

Materials

Material Name Type Company Catalogue Number Comment
C Tubes   Miltenyi Biotec Order no. 130-093-237 http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_709_765_gentleMACS_C_Tubes.aspx
gentleMACS™ Starting Kit   Miltenyi Biotec Order no. 130-093-235 http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_709_763_gentleMACS_Dissociator.aspx
MACSmix™ Tube Rotator   Miltenyi Biotec Order no. 130-090-753 http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_34_251_MACSmix_Tube_Rotator.aspx
autoMACS™ Rinsing Solution   Miltenyi Biotec Order no. 130-091-222 http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_134_155_autoMACS_Rinsing_Solution.aspx
MACS® BSA Stock Solution   Miltenyi Biotec Order no. 130-091-376 http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_33_295_MACS_BSA_Stock_Solution.aspx
CD11c MicroBeads   Miltenyi Biotec Order No. 130-052-001 http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_93_132_CD11c_MicroBeads.aspx
CD11c-FITC, CD11c-PE   Miltenyi Biotec Order no. 130-092-026 130-091-830 http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_599_329_CD11c.aspx
Anti-mPDCA-1-APC   Miltenyi Biotec Order no. 130-091-963 http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_599_325_Anti_mPDCA_1.aspx
CD146-FITC   Miltenyi Biotec Order no. 130-092-026 http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_599_417_CD146_LSEC_.aspx
CD45-PE   Miltenyi Biotec Order no. 130-091-610 http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_599_331_CD45.aspx
Propidium Iodide Solution   Miltenyi Biotec Order no. 130-093-233 http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_337_744_Propidium_Iodide_Solution.aspx
Art 1000 Reach Pipet Tips   Molecular BioProducts Order no. 2079 http://www.mbpinc.com/ASP/products.aspx?query_TipID=61
http://www.mbpinc.com/html/products/art/display.html

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Cite This Article
Jungblut, M., Oeltze, K., Zehnter, I., Hasselmann, D., Bosio, A. Standardized Preparation of Single-Cell Suspensions from Mouse Lung Tissue using the gentleMACS Dissociator. J. Vis. Exp. (29), e1266, doi:10.3791/1266 (2009).

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