Пакетный Иммуноокрашивание крупномасштабных белка Обнаружение в весь мозг обезьяны
Summary
Крупномасштабные иммунодетекции белков-мишеней по всей мозга приматов можно, используя новые ткани вложения и секционирования методами в сочетании с использованием творческого аппарата для пакетной окрашивание нескольких свободно плавающих участков на данный момент времени.
Abstract
Иммуногистохимии (IHC) является одним из наиболее широко используемых лабораторных методов для выявления белков-мишеней<em> На месте</em>. Вопросы, касающиеся выражения структура белка-мишени по всему мозгу могут быть сравнительно легко ответить при использовании IHC в маленький мозг, такие, как у грызунов. Однако, отвечая на те же вопросы в крупных и запутанные мозги, такие как приматы представляет ряд проблем. Здесь мы представляем систематический подход к иммунодетекции целевых белков в мозгу взрослого организма обезьяны. Этот подход основан на ткани вложения и секционирования методологии Neuroscience Associates (NSA), а также инструменты, разработанные специально для пакетной окрашивание свободно плавающего разделов. Это приводит в погонах окрашивание множество разделов, которые в конкретный интервал, представляет весь мозг. В результате окрашенные срезы могут быть подвергнуты широкий спектр аналитических процедур с целью определения белка, население нейронов выражения определенного белка.
Protocol
Discussion
Есть два важных шагов в этой процедуре, которые делают крупномасштабные обнаружения белков в весь мозг обезьяны возможно. Одним из них является вложение и секционирования протокол, который остается собственностью знание АНБ. Другое использование окрашивания блюд и корзины предостав?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Мы благодарны Франк Эрвин, Роберта Palmour и сотрудники Фонда поведенческих наук лаборатории расположены в Сент-Китс, Вест-Индии, за их постоянную поддержку нашей работы приматов. Эта работа была поддержана общение с ломкой Х исследовательского фонда Канады (FXRFC) для SZ и – операционной грантов от канадского института исследований в области здравоохранения (АС) и Национальной инженерной и научно-исследовательского совета Канады (МП).
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| anti-FMRP monoclonal antibody | Chemicon | MAB2160 | Requires antigen retrieval in fixed tissue. | |
| anti-NeuN monoclonal antibody | Chemicon | MAB377 | N/A | |
| anti-Neurofilament H monoclonal antibody | Sternberger Monoclonals Inc. | SMI32 | N/A | |
| Antigen Unmasking Solution | Vector Laboratories | H-3300 | N/A | |
| Normal horse serum | Invitrogen | 16050122 | 500 mL | |
| Biotinylated Anti-Mouse IgG (H+L), made in horse | Vector Laboratories | BA-2000 | ||
| VECTASTAIN ABC Kit (Standard) | Vector Laboratories | PK-4000 | 1.5 mg | |
| Staining dish for floating sections | HistoTools | 10009 | 12 x 65 mm | |
| Staining transport basket | HistoTools | 10012 | large (fits 12 x 65 mm dish) |
|
| Triton X-100 | Fisher Scientific | P8514B | N/A | |
| DAB | Fisher Scientific | AC11209-0050 | N/A |
References
- Olfert, E. D., Cross, B. M., McWilliam, A. A. . Guide to the Care and Use of Experimental Animals. , (1993).
- Devys, D., Lutz, Y., Rouyer, N., Bellocq, J. P., Mandel, J. L. The FMR-1 protein is cytoplasmic, most abundant in neurons and appears normal in carriers of a fragile X premutation. Nat Genet. 4, 335-340 (1993).
- Mullen, R. J., Buck, C. R., Smith, A. M. NeuN, a neuronal specific nuclear protein in vertebrates. Development. 116, 201-211 (1992).
- Sternberger, L. A., Sternberger, N. H. Monoclonal antibodies distinguish phosphorylated and nonphosphorylated forms of neurofilaments in situ. Proc Natl Acad Sci U S A. 80, 6126-6130 (1983).
