בשנת vivo Ca 2 + - הדמיה של נוירונים גוף אינפקטד במהלך הלמידה חוש הריח של דבורת הדבש
Summary
דבורים יכול להיות מותנה פרדיגמה למידה תיאבון חוש הריח (PER מיזוג). באמצעות ריחות כמו גירויים, הקמנו שיטה שבה התנהגות נרשם ובמקביל הדמיה סידן משמשת למדידת פעילות ריח עורר בנוירונים גוף הפטרייה<em> In vivo</em>.
Abstract
In vivo למחצה בהכנת vivo הדמיה סידן פותחה במעבדה שלנו על ידי Joerges, קוטנר ואת גליציה לפני יותר מעשר שנים, כדי למדוד את פעילות ריח עורר באונה מחושים 1. מכאן ואילך זה כבר מעודן ברציפות להחיל neuropiles שונים במוח הדבורה. כאן, אנו מתארים את הכנת המשמש כיום במעבדה כדי למדוד פעילות הנוירונים בגוף הפטרייה באמצעות מצמידים dextran סידן רגיש צבע (Fura-2). אנו retrogradely כתם נוירונים גוף הפטרייה על ידי הזרקת צבע לתוך האקסונים שלהם או באזור סומה. אנו מתמקדים בהפחתת הפולשנות, כדי להשיג הכנה שבו עדיין אפשר לאמן את הדבורים באמצעות PER מיזוג. אנו מסוגלים לפקח לכמת את התגובה ההתנהגותית באמצעות הקלטה אלקטרו myograms של השריר השולט PER (M17) 2.
לאחר הניסוי פיזיולוגיים המבנים צילמו נחקרות ביתר פירוט באמצעות מיקרוסקופ סורק confocal לכתובת זהותו של הנוירונים.
Protocol
Discussion
במצגת זו אנו עברו את כל השלבים לחקור אותות סידן vivo של דבורת דבש. אנחנו מוחלים בטכניקה זו כדי נוירונים הגוף פטריות, אבל הדמיה ניתן לעשות על כל הנוירונים אשר טכניקה מכתים ניתן להקים. התמקדנו נוירונים במסלול חוש הריח של הדבורה דבש. הניסויים מתבצעים כל בחדר חושך….
Acknowledgements
עבודה זו ממומנת על ידי DFG.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| low melting point hard wax Deiberit 502 | Dr. Böhme & Schöps Dental GmbH | |||
| FURA-2 dextran potassium salt, 10 000 MW | Invitrogen/Molecular Probes | F-3029 | Protect from light. | |
| tetramethylrhodamine dextran 10 000 MW | Invitrogen/Molecular Probes | D-3312 | Protect from light. | |
| n-eicosane | Sigma-Aldrich | 21, 927-4 | ||
| Kwik Sil Adhesive | WPI | KWIK SIL | ||
| Imaging Set-up | TILL Photonics | |||
| CCD camera | Imago | |||
| CED | Texas Instruments |
References
- Joerges, J., Küttner, A., Galizia, C. G., Menzel, R. Representations of odors and odor mixtures visualized in the honeybee brain. Nature. 387 (6630), 285-288 (1997).
- Rehder, V. Quantification of the honeybee’s proboscis reflex by electromyiographic recordings. J. Insect Physiol. 33, 501-507 (1987).
- Galizia, C. G., Vetter, R. S., Christensen, T. A. Optical Methods for Analyzing Odor-Evoked Activity in the Insect Brain. Methods in Insect Sensory Neuroscience. , 345-388 (2004).
- Mauelshagen, J. Neural correlates of olfactory learning paradigms in an identified neuron in the honeybee brain. J Neurophysiol. 69 (2), 609-625 (1993).
- Kuwabara, M. Bildung des bedingten Reflexes von Pavlovs Typus bei der Honigbiene Apis mellifica, Hokaido Univ. Zool. J. Sci. 13, 458-464 (1957).
- Bitterman, M. E., Menzel, R., Fietz, A., Schafer, S. Classical conditioning of proboscis extension in honeybees (Apis mellifera. Journal of Comparative Psychology. 97 (2), 107-119 (1983).
